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此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。4、幾種常用免疫組化方法簡(jiǎn)單介紹1)免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。2)免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)。基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是**常用的技術(shù)。該方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是:定位準(zhǔn)確,對(duì)比度好,染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來(lái)越方便。北京七色免疫組化技術(shù)服務(wù)
是一種小分子維生素,分子量為244,是轉(zhuǎn)氨甲?;^程中的輔酶。·抗生物素(avidin),又稱卵白素或親和素,是一種分子量為67000的堿性蛋白,對(duì)生物素具有很強(qiáng)的親和力,比抗原抗體間的親和力要高出100萬(wàn)倍。它由4個(gè)亞基組成,每個(gè)亞基都有生物素的結(jié)合位點(diǎn)?!烧呔膳c抗體等大分子生物活性物質(zhì)相偶聯(lián),又可被酶類等多種示蹤物所標(biāo)記,形成生物素-抗生物素系統(tǒng)。–該系統(tǒng)一端偶聯(lián)大分子生物反應(yīng)體系,另一端連結(jié)標(biāo)記物,后者加入酶的底物,產(chǎn)生顏色反應(yīng)。(1)標(biāo)記抗生物素—生物素法(labelledavidin-biotinmethod,LAB):分為直接法和間接法。·直接法用生物素標(biāo)記***抗體,與抗原結(jié)合;酶標(biāo)記抗生物素,與生物素結(jié)合,然后進(jìn)行酶呈色反應(yīng)?!らg接法用生物素標(biāo)記二抗,酶標(biāo)記抗生物素,先用***抗體與組織抗原結(jié)合,再將第二抗體與***抗體相連結(jié),***進(jìn)行呈色反應(yīng)。(2)橋抗生物素一生物素法(bridgeavidin-biotinmethod,BRAB)–此法是用生物素分別標(biāo)記抗體和酶,以抗生物素為橋,把二者連接起來(lái),進(jìn)行呈色反應(yīng)。(3)抗生物素-生物素-過氧化物酶法(ABC法)·ABC法是在BRAB和LAB的基礎(chǔ)上改良的方法?!BC復(fù)合物是將過氧化物酶結(jié)合在生物素上。
6、Indo-1Indo-1是典型的雙發(fā)射熒光探針,無(wú)鈣時(shí)在485nm左右有發(fā)射峰,結(jié)合鈣后,則在405nm處有發(fā)射峰,兩者的比值與細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度成線性關(guān)系,將此比值與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比即可得出細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度,因此,可利用此探針定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度。7、量子點(diǎn)(quantumdot)量子點(diǎn)是近年來(lái)研制的一種新型熒光染料,又稱半導(dǎo)體納米晶體,是由幾百或幾千個(gè)納米級(jí)顆粒構(gòu)成的半導(dǎo)體材料,性質(zhì)穩(wěn)定,溶于水,細(xì)胞本身不能合成和組裝。量子點(diǎn)具有熒光時(shí)間長(zhǎng)、產(chǎn)生多種顏色、檢測(cè)方便和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。8、辣根過氧化物酶辣根過氧化物酶是一種糖蛋白,由于在辣根中該酶的含量很高,故得名。它以鐵卟啉為輔基,在過氧化氫存在時(shí)能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。通常用做光學(xué)和電子顯微鏡的組織化學(xué)示蹤物。該酶比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以較為常用,不但可以用于免疫組化染色,也***運(yùn)用于免疫類(ELISA)試劑盒。過氧化物酶作為多個(gè)試劑盒顯色體系的關(guān)鍵成分,對(duì)試劑盒的質(zhì)量有重要影響。
2. 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是目前免疫組織化學(xué)研究中**常用的技術(shù).基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究.3. 免疫膠體金技術(shù)就是用膠體金標(biāo)記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究.天津多靶點(diǎn)免疫組化技術(shù)服務(wù)
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免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)組織印片·將潔凈載玻片輕壓于已暴露病灶的新鮮組織切面,細(xì)胞即粘附于玻片,晾干后浸入冷**或醋酸-乙醇固定10min,自然干燥后染片或-20℃保存。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)片(細(xì)胞爬片)·貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),置蓋片于培養(yǎng)瓶中,使細(xì)胞在蓋片上生長(zhǎng),達(dá)適當(dāng)密度后取出固定(**-20?C固定10~20min),再進(jìn)行免疫染色。–蓋片的處理方法同載玻片的處理,但泡酸時(shí)間2h即可。–為了防止細(xì)胞脫片,可用多聚賴氨酸處理。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞涂片·大多數(shù)細(xì)胞涂片由細(xì)胞懸液制成,包括:–血液、尿液、腦脊液;–體腔積液;–組織穿刺吸取,如骨髓、淋巴結(jié)或其他實(shí)質(zhì)性組織–懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或貼壁細(xì)胞經(jīng)消化后形成的懸液。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞涂片(續(xù))·細(xì)胞涂片的方法:–手涂法·將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)到106/ml左右,可直接涂于載玻片上,但要均勻、不重疊?!D片范圍應(yīng)小于1cm直徑,以節(jié)約試劑。–涂片機(jī)涂片法·將細(xì)胞樣品制成2×105~6/ml細(xì)胞懸液,吸取50~100?l(1~2×104~5cells)加入涂片機(jī)內(nèi),1000rpm離心2min后細(xì)胞就均勻分布于玻片上。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)常用染色方法根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法、免疫酶標(biāo)法、親和組織化學(xué)法。北京七色免疫組化技術(shù)服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)立于2003-01-22,總部位于上海市,是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司。上海朝瑞科技深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)?,為客戶提?**的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司終堅(jiān)持自主研發(fā)創(chuàng)新發(fā)展理念,不斷優(yōu)化的技術(shù)、產(chǎn)品為客戶帶來(lái)效益,目前年?duì)I業(yè)額達(dá)到2000-3000萬(wàn)元。上海朝瑞科技創(chuàng)始人仲緒軍,始終關(guān)注客戶,以優(yōu)化創(chuàng)新的科技,竭誠(chéng)為客戶提供比較好的服務(wù)。
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