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產品關鍵詞:北京多色熒光免疫組化染色服務,免疫組化
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因而乙醇固定時間不宜過長(2h內)?!ひ掖际沟鞍鬃冃缘淖饔幂p,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應強度。(3)其它固定劑·**:–對抗原性的保存好,但脫水性更強,較少用于組織標本,但細胞爬片常用**固定。3、抗原修復——原因·常規(guī)的石蠟切片標本均用甲醛固定,結果使得:–抗原性物質形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇;–蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽?!ひ螅涸谌旧珪r,北京多色熒光免疫組化染色服務,需要先進行抗原修復或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復抗原的原有空間形態(tài)。3、抗原修復——方法·化學方法·加熱方法–水浴加熱法–微波照射法–高壓加熱法–酸水解法(1)化學方法·主要是通過一些酶的作用,使抗原決定簇暴露。常用的酶有:胰蛋白酶、胃蛋白酶等。–胰蛋白酶:一般使用濃度為~,消化時間為37?C,北京多色熒光免疫組化染色服務,10~40**要用于細胞內抗原的顯示;–胃蛋白酶:一般使用濃度為~,北京多色熒光免疫組化染色服務,消化時間為37?C、30~180**要用于細胞間質抗原的顯示?!だ纾篖aminin、CollagenIV(2)水浴加熱法·將玻片放入裝有抗原修復液的容器中,加熱至沸騰,持續(xù)10~15分鐘。–優(yōu)點:操作簡單、經濟,適用于所有的實驗室。北京多色熒光免疫組化染色服務
6)滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體,室溫/37℃孵育30分鐘-1h,PBS/TBS沖洗,3分鐘×5次。7)應用DAB溶液顯色。8)蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明、封片。三、免疫熒光技術(略)1、酶免疫組化的關鍵環(huán)節(jié)1)標本固定固定的目的是①防止標本從玻片上脫落;②除去妨礙抗原-抗體結合的類脂,使抗原抗體結合物易于獲得良好的染色結果;③固定的標本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛,但睪丸組織、眼可能要選用Bouin’s液或mDF液效果較好。2)脫水、石蠟包埋和制片脫水用梯度乙醇(由低到高)充分脫水、對組織要完全浸蠟、切片時刀片要干凈和鋒利。否則,容易裂片和脫片等。3)脫蠟和水化這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結合反應。脫蠟可以先60℃20min,然后立即二甲苯1-3分別10min(這個時間是由二甲苯新鮮程度和室溫等綜合決定的),但當天制好的切片一般先60℃3-4h。水化用梯度乙醇(由高到低)。若脫蠟和水化不全易出現(xiàn)局灶性反應和浸洗不全,而產生非特異性背景著色。4)抗原修復由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,從而失去抗原性;通過抗原修復,使得細胞內抗原決定族重新暴露。天津多靶點免疫組化技術服務
提高抗原檢測率。常用的修復方法從強到弱一般分為三種,高壓修復、微波修復、胰酶修復。修復液也分為若干種(具體的可以查閱相關資料,大量的:中性的、高pH的等)。我們實驗室一般用微波修復中火6min*4次,效果不錯。注意微波修復后自然冷卻30min左右(只要你覺得修復液的溫度達室溫即可)。5)細胞通透目的是使抗體能夠充分地進入胞內進行結合反應。一般用TritonX-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解細胞膜、細胞核膜、細胞器膜上的脂質而使抗體及大分子結構的物質進入胞漿和胞核內,故在細胞免疫組化時尤為推薦使用,這樣抗體就能順利進入胞內與相應抗原結合。在免疫組織化學(>10um厚切片)和免疫細胞化學中一般用TritonX-100作為細胞通透劑,在膜上打孔。同時也是一種去污劑,一般在PBS中加入后終濃度是,而前者終濃度是。石蠟切片4um左右可以不通透,因為細胞已經被切開了。6)滅活內源性過氧化物酶和生物素在傳統(tǒng)的ABC法和SP法中,免疫組化反應結果容易收到內源性過氧化物酶和生物素的干擾,必須用過氧化氫和卵白素等進行滅活。滅活內源性POD一般3%過氧化氫滅活時間短點,可以10min左右,而,一般10~30min。
實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用、**基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法??贵w免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物。
【多色免疫組化染色樣本要求】1福爾馬林固定的蠟塊或玻片,大塊組織或TMA都可以,封蠟不能有明顯的破損。2玻片樣本,組織需要緊貼玻片,避免褶皺,玻片不能有破損、劃傷或污漬。3組織**小應包含大于1000個細胞。4蠟塊需包埋實體瘤組織,壞死瘤組織、細針穿刺物、細胞甩片樣品會影響染色效果。5組織應當用10%中性福爾馬林固定,正常固定時間為18~24小時。6切片厚度為4μm左右,使用防脫玻片。建議玻片在固定后一周內制備為佳。7不要在水浴撈片環(huán)節(jié)添加任何粘合劑,樣本應置于玻片正面、**。將撈片豎直置于吸水紙上去除水分,輕敲去除水滴,不要用紙擦拭玻片。8玻片置于45°C熱盤上放置30min(自然風干玻片時長不小于1小時)?!驹O備耗材】1檢驗所需設備器材:熒光顯微鏡、通風櫥、移液器、恒溫干燥箱、微波爐、計時器2檢測所需耗材器皿:免疫組化筆、微波修復杯、染色缸、孵育濕盒、蓋玻片、洗瓶、量筒100ml、量筒1000ml等【試劑制備】1通用試劑:DMSO、miejun去離子水、二甲苯、乙醇(全部、95%、70%)、10%中性福爾馬林、抗原修復液(推薦使用佰諾全景酸性或堿性抗原修復液)、一抗封閉液等。北京六色免疫組化染色服務
北京多色熒光免疫組化染色服務
在肌肉、皮下、靜脈或腹腔內注射;·抗體效價的檢測:加強免疫一周后,耳緣靜脈**–抗體效價測定可用環(huán)狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴散法等方法。前者抗體效價在1:4000以上,后者在1:16以上,即可**,取血清進一步提純。舉例2:微量抗原淋巴結內注射免疫家兔·一般選擇~–先在其兩腳墊注射完全福氏佐劑(卡介苗每兔合5mg);–10天后,見胭窩淋巴結腫大,然后將抗原注射至腫大的淋巴結內,***次注射抗原用完全福氏佐劑混合乳化;–以后每隔20天用不完全福氏佐劑乳化抗原,以同樣方法加強2次,各次注射的抗原均為25~50?g;–末次注射兩周后兔耳放血測價(可達1:128)。舉例3:豚鼠和大鼠的免疫·初次免疫–用10~100?gAg加入FCA,在背部皮內注射4~6點,每點,也可肌肉內或皮下注射;·加強免疫–每隔7~8天,將10~50?gAg于PBS或FIA中。在肌肉、皮下或靜脈注射;·抗體效價的檢測(4)免疫劑量·抗原性強的抗原量應小,過大反會引起免疫***;·免疫周期長的動物可少量多次注射,短的可大量少次。(4)免疫劑量(續(xù))·各種動物***免疫抗原劑量和加強免疫的劑量(5)抗體效價的檢測多采免疫雙向擴散法【基本原理】·指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散,彼此相遇后形成特異性的沉淀線。北京多色熒光免疫組化染色服務
上海朝瑞生物科技有限公司于2003-01-22成立,注冊資本700-1000萬元元,現(xiàn)有專業(yè)技術人員5~10人人,各種專業(yè)人員齊備。專業(yè)的團隊大多數(shù)員工都有多年工作經驗,熟悉行業(yè)專業(yè)知識技能,致力于發(fā)展zrbiorise,SPRICELL,scienceladde的品牌。公司以用心服務為**價值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務等業(yè)務進行到底。上海朝瑞生物科技有限公司主營業(yè)務涵蓋[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產品銷售" ],堅持“質量***、質量服務、顧客滿意”的質量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/284075.html
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