免疫組化細(xì)胞凋亡檢測細(xì)胞凋亡原理：正常凋亡細(xì)胞通過檢測凋亡細(xì)胞DNA片段進行染色，正常的、人為造成凋亡的細(xì)胞很少能夠被染色。以甲基綠復(fù)染，北京六色免疫組化染色服務(wù)，便于從形態(tài)學(xué)上分辨評估正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。首先確定目標(biāo)凋亡細(xì)胞的組織部位（如眼球組織，由于玻璃體結(jié)構(gòu)內(nèi)沒有細(xì)胞核，因此看不到凋亡，在整個組織的**外面有單層視網(wǎng)膜細(xì)胞，因此只能在**邊緣查看凋亡細(xì)胞的陽性產(chǎn)物）免疫組化關(guān)于掉片HE、Masson，北京六色免疫組化染色服務(wù)、番紅O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象；免疫組化和細(xì)胞凋亡檢測我們采用專門購買的防脫片，由于整個實驗流程比較長，在實驗過程中產(chǎn)生掉片是很正常的現(xiàn)象。對于容易掉片的組織，如：骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時候是不可避免的。免疫組化經(jīng)驗總結(jié)編輯做過病理實驗的人都知道，實驗看似容易，但真想把它做好，北京六色免疫組化染色服務(wù)，還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗。我從事病理實驗已有6年多了，在這段時間里，我做過許許多多病理相關(guān)實驗，剛開始啥也不懂，一味按照網(wǎng)上操作流程來做，但做的結(jié)果往往并不是十分理想，**終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。經(jīng)過一段時間的瀏覽和學(xué)習(xí)，從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請教，并結(jié)合實踐操作，我經(jīng)歷了初級——查找資料和摸索方法。北京六色免疫組化染色服務(wù)

    續(xù))·**過程中，動作要輕柔，盡量避免溶血·血液凝固后，及時離心收集血清，否則細(xì)胞溶解釋放的雜蛋白(例如蛋白水解酶)將污染抗體并將抗體水解，降低效價；·加疊氮化鈉，分裝，低溫保存，也可加一定的保護劑如BSA、甘油等。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)標(biāo)本的制備·標(biāo)本制備恰當(dāng)，是免疫組化成功的首要條件·免疫組化對組織和細(xì)胞標(biāo)本的要求–保持所檢標(biāo)本原有的結(jié)構(gòu)、形態(tài)；–在原位很大程度地保持待測抗原(或抗體)的免疫活性，既不淬滅、流失或彌散，也不被隱蔽。·免疫組化的組織和細(xì)胞標(biāo)本，制作流程與常規(guī)處理方法基本相同，但對組織、細(xì)胞的處理又有其特殊要求及注意事項。–各種抗原由于其含量及特性的差異對標(biāo)本處理方式常有不同要求，因此要選擇適用于本實驗的比較好方法。免疫組化中常用的組織和細(xì)胞標(biāo)本·組織標(biāo)本–石蠟切片–冰凍切片·細(xì)胞標(biāo)本–組織印片–細(xì)胞培養(yǎng)片(細(xì)胞爬片)–細(xì)胞涂片免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)石蠟切片·石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法–比較大優(yōu)點是組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；–石蠟塊還能長期存檔，供回顧研究?！な炃衅谱鬟^程對組織內(nèi)抗原顯現(xiàn)有一定的影響，但可通過某些措施予以改善。江蘇多靶點免疫組化檢測服務(wù)

    5、免疫組化技術(shù)掌握與否的鑒定標(biāo)準(zhǔn)是同一切片或不同切片中不同抗原均從摸索濃度或條件而做出優(yōu)良的染色切片。我發(fā)現(xiàn)許多研究生把網(wǎng)上或者說明書摸索的反應(yīng)條件、濃度、方法步驟，重復(fù)運用于同一性質(zhì)的切片和同一種抗體，做出來后就覺得自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法，更換一種抗體后，居然連二抗的種屬來源都拿錯了。失敗往往促進你去思考試驗原理和過程，成功有時也讓自己很自傲。6、免疫組化的應(yīng)用***，是當(dāng)前實驗研究的**重要方法之一。如今發(fā)SCI論文時，明顯感覺*靠量化的數(shù)據(jù)來發(fā)文章很難，加一些形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)或圖片，老外十分歡迎，可能是怕你學(xué)術(shù)造假吧。當(dāng)然也不能做假陽性或假陰性結(jié)果。7、實驗方法需要動手和動腦。經(jīng)過了反復(fù)的動手和動腦，把理論原理運用于實踐，在把實踐中發(fā)現(xiàn)的問題帶到理論知識中去解決，**終把理論與實踐融會貫通。必要時去各大論壇或者一些**公司尋求幫助，個人感覺上海舜田生物技術(shù)支持不錯，服務(wù)質(zhì)量也很好。下面先介紹下免疫組化的概念和常用方法，以便讓大家對免疫組化更深入地理解和掌握。概念和常用方法介紹1、定義用標(biāo)記的特異性抗體對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究。

    是分泌性蛋白檢測優(yōu)先方法之一。下面介紹下免疫組化方法的具體實驗流程步驟。實驗流程簡介一、SP三步法1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。2)（無色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來源一致。傾去，勿洗。6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時或4℃過夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。8)PBS沖洗，3分鐘×5次。9）滴加SP（鏈霉親和素-過氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。10)PBS沖洗，3分鐘×5次。11）顯色劑顯色（DAB等）。12）自來水充分沖洗。13）可進行復(fù)染，脫水，透明。14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄６?、即用型二步?）脫蠟、水化組織切片。2）根據(jù)所應(yīng)用的一抗的特殊要求，對組織切片進行預(yù)處理。3)，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS或TBS沖洗。4）滴加一抗，室溫或37℃孵育30~60分鐘，或4℃過夜，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次。5）滴加enhangcer增強劑，37℃30min，PBS或TBS浸洗3分鐘×5次。

    免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫熒光法【原理】·用于免疫熒光的標(biāo)記物是小分子的熒光素，可標(biāo)記抗體或抗原；免疫熒光技術(shù)·熒光素經(jīng)某種特定波長的光照射激發(fā)后，能發(fā)射出一種比激發(fā)光波波長更長而且能量較低的熒光，籍此可作定位觀察或示蹤；·借助于熒光顯微鏡進行觀察。1、常用的熒光素·(1)異硫氰酸熒光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)·(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TetramethylRhodamineIsothiocyanate,TRITC)·(3)四乙基羅丹明(RB200)·(4)碘化丙啶(propidiumiodide,PI)(1)異硫氰酸熒光素(FITC)·易溶于水和乙醇。·比較大吸收光譜為490～495nm，比較大發(fā)射光譜為520～530nm．呈翠綠色熒光，分子量?！ぴ趬A性條件下，F(xiàn)ITC的異硫氰酸基在水溶液中與Ig的自由氨基形成共價鍵，成為標(biāo)記的熒光抗體。一個lgG分子上**多能標(biāo)記15～20個FITC分子。(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)·比較大吸收光譜550nm，比較大發(fā)射光譜620nm，呈紅色熒光，分子量為444?！づc蛋白質(zhì)結(jié)合的方式同F(xiàn)ITC。(3)四乙基羅丹明(RB200)·不溶于水，易溶于乙醇和**。·比較大吸收光譜為570nm，比較大發(fā)射光譜為595～600nm，呈橙紅色熒光，分子量為580?！B200在五氯化磷(PCl5)作用下轉(zhuǎn)變成磺酰氯(SO2Cl)。江蘇多色熒光免疫組化檢測服務(wù)

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    但也存在主次之分，出現(xiàn)問題了，需要通過先排除主要的，再依次排除次要的--這是衡量你對免疫組化原理掌握與否的關(guān)鍵所在。案例三石蠟切片免疫熒光染色呈陰性結(jié)果或非特異性結(jié)果背景：因?qū)嶒炐枰?，?008年07月04日初次做肝臟組織ZO-1（一種胞膜蛋白，緊密連接蛋白）免疫熒光染色，以前我對酶免疫組化非常熟悉，在丁香園子內(nèi)也有不少置頂貼和精華帖，但免疫熒光一直還沒做過（原理知道，但細(xì)節(jié)不太了解）。我先用石蠟切片做了5次，結(jié)果一直不理想（表現(xiàn)為未見特異性強染色）；近幾日，在舜田生物老師的幫助下，我又切了冰凍切片，做了2次，終于基本成功了。在這個過程中，我對免疫熒光染色技術(shù)有了全新的認(rèn)識，而前些天發(fā)出免疫熒光求助貼，回復(fù)的很少，所以有必要加強對免疫熒光方面的討論），不妥之處敬請指正。有人會問酶免疫組化做的好好的，為何要做免疫熒光？其實，這也是我以前思考的難題，現(xiàn)在我認(rèn)為可能胞膜蛋白含量不高，用普通免疫免疫組化可能做不出來，需要敏感的免疫熒光方法來進行蛋白檢測（我是看許多外文文獻(xiàn)都是這樣做的，因此選擇免疫熒光染色。北京六色免疫組化染色服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司始建于2003-01-22，坐落于上海市松江區(qū)廣富林路697號昂立大廈2113室，現(xiàn)有員工5~10人余人。在上海朝瑞科技近多年發(fā)展歷史，公司旗下現(xiàn)有品牌zrbiorise,SPRICELL,scienceladde等。公司不**提供專業(yè)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù),同時還建立了完善的售后服務(wù)體系,為客戶提供質(zhì)量的產(chǎn)品和服務(wù)。上海朝瑞科技始終以質(zhì)量為發(fā)展，把顧客的滿意作為公司發(fā)展的動力，致力于為顧客帶來***的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。

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