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產品關鍵詞:江蘇多靶點免疫組化檢測服務
***更新:2020-06-17 20:28:34
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6、看來主要禍根是抗體稀釋液的pH值出問題了,于是我又用PBS替代抗體稀釋液和新試劑盒內的試劑對組織切片做了免疫組化,結果還是沒有做出來:背景很深。這真把我搞慘了。難道還有什么原因嗎?通過仔細分析:一抗一定是結合上去了(老SP試劑盒結果很好),問題是二抗沒有結合上去也不對(因為***背景很深,這說明二抗可能也結合上去了),DAB孵育時間現(xiàn)在只用1、5min也是背景深而特異性染色淺,那我又懷疑封閉血清了。7、我做了兩張切片:一張用老試劑盒內還剩下一點的血清而另一張用新試劑盒內的封閉血清,其余試劑(二抗、SP)均用新試劑盒提供的,結果是前一張效果很好,而后一張能夠看到特異性染色,但背景太深,江蘇多靶點免疫組化檢測服務,拍照效果不佳,江蘇多靶點免疫組化檢測服務,江蘇多靶點免疫組化檢測服務??磥矸忾]血清也是罪會禍首之一。結果分析顯示:抗體稀釋液的PH值偏低和封閉血清的失效導致了我的免疫組化結果的不佳,望大家在以后的組化實驗中也要注意這兩個不太引人注意的關鍵問題。慘痛的教訓,值得引以為鑒。案例二DAB染色后切片著色呈陰性結果背景:其實免疫組化在DAB染色后一般有四種情況:陽性染色效果很好、陰性染色、非特異性染色很深、陰陽臉(染色不均勻)。而陰性染色是許多初學者經常遇到的頭疼問題。
[1]免疫組化分類編輯免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。這些常用免疫組織化學方法的原理如下:1.免疫熒光細胞化學技術將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.2.免疫酶細胞化學技術是免疫組織化學研究中**常用的技術.基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究.3.免疫膠體金技術就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究.[1]免疫組化作用編輯免疫組化標本實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。
免疫細胞化學技術免疫熒光法【原理】·用于免疫熒光的標記物是小分子的熒光素,可標記抗體或抗原;免疫熒光技術·熒光素經某種特定波長的光照射激發(fā)后,能發(fā)射出一種比激發(fā)光波波長更長而且能量較低的熒光,籍此可作定位觀察或示蹤;·借助于熒光顯微鏡進行觀察。1、常用的熒光素·(1)異硫氰酸熒光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)·(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TetramethylRhodamineIsothiocyanate,TRITC)·(3)四乙基羅丹明(RB200)·(4)碘化丙啶(propidiumiodide,PI)(1)異硫氰酸熒光素(FITC)·易溶于水和乙醇?!け容^大吸收光譜為490~495nm,比較大發(fā)射光譜為520~530nm.呈翠綠色熒光,分子量。·在堿性條件下,F(xiàn)ITC的異硫氰酸基在水溶液中與Ig的自由氨基形成共價鍵,成為標記的熒光抗體。一個lgG分子上**多能標記15~20個FITC分子。(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)·比較大吸收光譜550nm,比較大發(fā)射光譜620nm,呈紅色熒光,分子量為444?!づc蛋白質結合的方式同F(xiàn)ITC。(3)四乙基羅丹明(RB200)·不溶于水,易溶于乙醇和**?!け容^大吸收光譜為570nm,比較大發(fā)射光譜為595~600nm,呈橙紅色熒光,分子量為580?!B200在五氯化磷(PCl5)作用下轉變成磺酰氯(SO2Cl)。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/293280.html
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