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提高抗原檢測率。常用的修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種,高壓修復(fù)、微波修復(fù),上海七色免疫組化檢測服務(wù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的、高pH的等)。我們實驗室一般用微波修復(fù)中火6min*4次,效果不錯。注意微波修復(fù)后自然冷卻30min左右(只要你覺得修復(fù)液的溫度達(dá)室溫即可)。5)細(xì)胞通透目的是使抗體能夠充分地進(jìn)入胞內(nèi)進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。一般用TritonX-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解細(xì)胞膜、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi),故在細(xì)胞免疫組化時尤為推薦使用,這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。在免疫組織化學(xué)(>10um厚切片)和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用TritonX-100作為細(xì)胞通透劑,在膜上打孔。同時也是一種去污劑,一般在PBS中加入后終濃度是,而前者終濃度是。石蠟切片4um左右可以不通透,因為細(xì)胞已經(jīng)被切開了。6)滅活內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在傳統(tǒng)的ABC法和SP法中,免疫組化反應(yīng)結(jié)果容易收到內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的干擾,上海七色免疫組化檢測服務(wù),必須用過氧化氫和卵白素等進(jìn)行滅活,上海七色免疫組化檢測服務(wù)。滅活內(nèi)源性POD一般3%過氧化氫滅活時間短點,可以10min左右,而,一般10~30min。
免疫組化細(xì)胞凋亡檢測細(xì)胞凋亡原理:正常凋亡細(xì)胞通過檢測凋亡細(xì)胞DNA片段進(jìn)行染色,正常的、人為造成凋亡的細(xì)胞很少能夠被染色。以甲基綠復(fù)染,便于從形態(tài)學(xué)上分辨評估正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。首先確定目標(biāo)凋亡細(xì)胞的組織部位(如眼球組織,由于玻璃體結(jié)構(gòu)內(nèi)沒有細(xì)胞核,因此看不到凋亡,在整個組織的**外面有單層視網(wǎng)膜細(xì)胞,因此只能在**邊緣查看凋亡細(xì)胞的陽性產(chǎn)物)免疫組化關(guān)于掉片HE、Masson、番紅O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象;免疫組化和細(xì)胞凋亡檢測我們采用專門購買的防脫片,由于整個實驗流程比較長,在實驗過程中產(chǎn)生掉片是很正常的現(xiàn)象。對于容易掉片的組織,如:骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時候是不可避免的。免疫組化經(jīng)驗總結(jié)編輯做過病理實驗的人都知道,實驗看似容易,但真想把它做好,還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗。我從事病理實驗已有6年多了,在這段時間里,我做過許許多多病理相關(guān)實驗,剛開始啥也不懂,一味按照網(wǎng)上操作流程來做,但做的結(jié)果往往并不是十分理想,**終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。經(jīng)過一段時間的瀏覽和學(xué)習(xí),從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請教,并結(jié)合實踐操作,我經(jīng)歷了初級——查找資料和摸索方法。
因而它是大多數(shù)免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法。1、取材的特殊要求及注意事項·標(biāo)本新鮮:一般在2h以內(nèi)進(jìn)行,超過2h,組織將有不同程度的自溶,其抗原或變性消失,或嚴(yán)重彌散?!と〔牟课唬撼〔≡罨蚝龣z抗原部位外,還應(yīng)取病灶與正常交界處,即所取組織切片中同時應(yīng)有抗原陽性和陰性區(qū),以形成自身對照。–細(xì)胞壞死后,不僅抗原彌散或消失,而且常引起非特異著色,干擾觀察,因此取材時應(yīng)盡可能避開壞死區(qū)。1、取材的特殊要求及注意事項(續(xù))·避免擠壓:取材時組織受擠壓可使邊緣部細(xì)胞形態(tài)改變并加深非特異著色,因而取材時應(yīng)使用鋒利的刀刃;–鑷取組織動作要輕;–經(jīng)窺鏡直接鉗取的組織往往有過度擠壓,觀察結(jié)果時應(yīng)有所考慮。2、固定及常用的固定液·取材后的組織需立刻投于固定劑中–固定使組織和細(xì)胞的蛋白質(zhì)凝固,終止內(nèi)源性或外源性酶反應(yīng),防止組織自溶或異溶,以保持原有結(jié)構(gòu)和形態(tài);–對免疫組化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或彌散?!こS霉潭ㄒ海汗潭▌┢贩N很多,但大多屬于醛類和醇類。其固定原理不同,各有優(yōu)缺點。–醛類(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)–醇類(常用乙醇)–其它(**)(1)醛類·甲醛。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/294561.html
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