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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津五色免疫組化分析服務(wù)
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問題及其解答:產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些?如何解決?1、抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是**重要的一條。2、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。3、內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;4、非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果;5、DAB孵育時間過長或濃度過高;6、PBS沖洗不充分,殘留抗體結(jié)果增強著色,天津五色免疫組化分析服務(wù),在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要;7、標本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片,這容易增強非特異性著色。我的實際解決方案:以上的分析可能對于初學者還是不容易的,天津五色免疫組化分析服務(wù),下面我就把我的排除實驗的具體過程與大家進行分享、交流和討論。1、首先排除抗體孵育條件。一般來說,著色效果的好壞與抗體的孵育條件是密不可分的,由于用SP法已經(jīng)做出來過一次且效果不錯,天津五色免疫組化分析服務(wù),因此對于同樣組織的同一抗原進行分析,這種因素可以先排除。2、其次,DAB孵育時間是否太長?做出來那一次我是孵育8min,后來也是8-10min。
⑹、滴加適量生物素標記二抗工作液,37℃孵育10-30分鐘。⑺、PBS沖洗,5分鐘x3次。⑻、滴加適量的辣根酶或堿性磷酸酶標記的鏈霉卵白素工作液,37℃孵育10-30分鐘。⑼、PBS沖洗,5分鐘x3次。⑽、顯色劑顯色3-15分鐘(DAB或NBT/BCIP)⑾、自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。免疫組化化染色步驟冰凍切片4-8μm,室溫放置30分鐘后,入4℃**固定10分鐘,PBS洗,5分鐘x3,用過氧化氫孵育5-10分鐘,消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。免疫組化判定分析編輯免疫組化染色(IHC)從實驗結(jié)果而言,免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實驗結(jié)果的描述與分析,圖片的確定與選取,相關(guān)數(shù)據(jù)的提供,上述工作是免疫組化工作的重點內(nèi)容,只有嚴格的實驗設(shè)計,標準的實驗操作,專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求,這點對于形式為腹水,上清,培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關(guān)于上述服務(wù)內(nèi)容應(yīng)該在實驗開始前由雙方明確,一般而言,客戶方實驗前應(yīng)提出需要什么樣的結(jié)果與分析,例如是簡要還是詳細的描述實驗結(jié)果,需要實驗數(shù)據(jù)否,圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗或有第三方參與,則事先申明。免疫組化意義編輯近年來,隨著免疫組織化學技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)。
80年代到90年代相繼又有新的熒光素出現(xiàn)如R-藻紅朊、B-藻紅朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡中廣泛應(yīng)用。由于免疫熒光組織化學的特異性,快速性和在細胞水平定位的準確性,已在免疫學、微生物學、病理學、**學以及臨床檢驗等許多方面得到廣泛應(yīng)用,日益發(fā)揮重要作用。[1]免疫組織化學技術(shù)現(xiàn)狀與展望編輯免疫熒光組織化學技術(shù)經(jīng)過半個多世紀的不斷改進和創(chuàng)新,已成為現(xiàn)代研究生物和醫(yī)學的重要手段之一。由于免疫熒光技術(shù)與形態(tài)、機能相結(jié)合不斷完善和發(fā)展,尤其是合成了多種新熒光素與抗體容易結(jié)合,且結(jié)合物穩(wěn)定??梢院虵ITC結(jié)合進行免疫熒光組織化學雙標記或三標記。至今,它已和親合化學技術(shù)如SPA、Biotin以及avidin、ConA相結(jié)合,應(yīng)用領(lǐng)域也日益擴大,又與現(xiàn)代的電子計算機、掃描電鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡、熒光***細胞分類器(FACS)以及數(shù)碼相機攝影技術(shù)的應(yīng)用,使得快速性、簡便性有了更大的提高,使得定量更加準確。90年代又開展了熒光原位末端標記和熒光原位雜交技術(shù),使得應(yīng)用范圍更廣。雖然免疫組織化學技術(shù)有了很大的發(fā)展,如免疫金銀法、免疫膠體金法、SP、Evision二步法和CSA法,但由于它有自己獨特的優(yōu)點:特異性強。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/297353.html
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