由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對病理學(xué)領(lǐng)域開展深入研究是十分有意義的。7、從蛋白水平檢測角度，免疫組化技術(shù)與Westernblotting、ELISA的異同1）Westernblotting蛋白質(zhì)免疫印跡，也是利用抗體抗原反應(yīng)原理，結(jié)合化學(xué)發(fā)光等技術(shù)來檢查組織或細(xì)胞樣品內(nèi)蛋白含量的檢測方法。與免疫組化技術(shù)相比，定量可能更加準(zhǔn)確；當(dāng)然Westernblotting也可定性和定位（通過提取膜蛋白或**白，天津五色免疫組化染色服務(wù)，天津五色免疫組化染色服務(wù)、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量，進(jìn)而間接反映它們的定位），但敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于免疫組化技術(shù)。2）ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗，也是利用抗體-抗原-抗原結(jié)合反應(yīng)原理來檢查體液或組織勻漿中蛋白含量的檢測，天津五色免疫組化染色服務(wù)。與免疫組化技術(shù)相比，定量**準(zhǔn)確。

實驗所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本**常用、**基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法?？贵w免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

    3、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)：該熒光素能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，比FITC穩(wěn)定性好，在生理條件下對pH值變化不敏感，熒光強度受自發(fā)熒光干擾小。比較大激發(fā)光波長為550nm；比較大發(fā)射光波長為620nm，呈橙紅色熒光，與FITC發(fā)出的黃綠色熒光對比鮮明，常用于免疫熒光組織化學(xué)雙重染色。4、花青類染料常用的有Cy3、Cy5等，能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合。這類染料的熒光特性與傳統(tǒng)熒光素類似，但水溶性和對光穩(wěn)定性較強，熒光量子產(chǎn)率較高，對pH等環(huán)境不敏感。常用于多重染色。5、乙酸甲酯其本身不發(fā)熒光，但透膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，在酯酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂袩晒馓匦缘囊宜峒柞ァＦ浼ぐl(fā)光譜有pH依賴性，是使用**多的細(xì)胞內(nèi)pH熒光指示劑。比較大激發(fā)光波長為505nm，比較大發(fā)射光波長為530nm，呈綠色熒光。

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