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免疫組化細(xì)胞凋亡檢測細(xì)胞凋亡原理:正常凋亡細(xì)胞通過檢測凋亡細(xì)胞DNA片段進(jìn)行染色,正常的、人為造成凋亡的細(xì)胞很少能夠被染色。以甲基綠復(fù)染,便于從形態(tài)學(xué)上分辨評估正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。首先確定目標(biāo)凋亡細(xì)胞的組織部位(如眼球組織,由于玻璃體結(jié)構(gòu)內(nèi)沒有細(xì)胞核,因此看不到凋亡,在整個組織的**外面有單層視網(wǎng)膜細(xì)胞,因此只能在**邊緣查看凋亡細(xì)胞的陽性產(chǎn)物)免疫組化關(guān)于掉片HE、Masson、番紅O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象;免疫組化和細(xì)胞凋亡檢測我們采用專門購買的防脫片,由于整個實(shí)驗(yàn)流程比較長,在實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生掉片是很正常的現(xiàn)象。對于容易掉片的組織,如:骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時候是不可避免的。免疫組化經(jīng)驗(yàn)總結(jié)編輯做過病理實(shí)驗(yàn)的人都知道,實(shí)驗(yàn)看似容易,上海四色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù),但真想把它做好,還是需要花上很長一段時間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。我從事病理實(shí)驗(yàn)已有6年多了,上海四色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù),在這段時間里,我做過許許多多病理相關(guān)實(shí)驗(yàn),上海四色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù),剛開始啥也不懂,一味按照網(wǎng)上操作流程來做,但做的結(jié)果往往并不是十分理想,**終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。經(jīng)過一段時間的瀏覽和學(xué)習(xí),從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請教,并結(jié)合實(shí)踐操作,我經(jīng)歷了初級——查找資料和摸索方法。
6)滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體,室溫/37℃孵育30分鐘-1h,PBS/TBS沖洗,3分鐘×5次。7)應(yīng)用DAB溶液顯色。8)蒸餾水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。三、免疫熒光技術(shù)(略)1、酶免疫組化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)1)標(biāo)本固定固定的目的是①防止標(biāo)本從玻片上脫落;②除去妨礙抗原-抗體結(jié)合的類脂,使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果;③固定的標(biāo)本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛,但睪丸組織、眼可能要選用Bouin’s液或mDF液效果較好。2)脫水、石蠟包埋和制片脫水用梯度乙醇(由低到高)充分脫水、對組織要完全浸蠟、切片時刀片要干凈和鋒利。否則,容易裂片和脫片等。3)脫蠟和水化這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應(yīng)。脫蠟可以先60℃20min,然后立即二甲苯1-3分別10min(這個時間是由二甲苯新鮮程度和室溫等綜合決定的),但當(dāng)天制好的切片一般先60℃3-4h。水化用梯度乙醇(由高到低)。若脫蠟和水化不全易出現(xiàn)局灶性反應(yīng)和浸洗不全,而產(chǎn)生非特異性背景著色。4)抗原修復(fù)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,從而失去抗原性;通過抗原修復(fù),使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露。
在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。3)免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。5、被檢測的物質(zhì)組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原,如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、***、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。6、特點(diǎn)1)特異性強(qiáng)免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時,才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2)敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/303292.html
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