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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上海多標(biāo)記免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)組織印片·將潔凈載玻片輕壓于已暴露病灶的新鮮組織切面,細(xì)胞即粘附于玻片,晾干后浸入冷**或醋酸-乙醇固定10min,自然干燥后染片或-20℃保存。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)片(細(xì)胞爬片)·貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),上海多標(biāo)記免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù),置蓋片于培養(yǎng)瓶中,使細(xì)胞在蓋片上生長,達(dá)適當(dāng)密度后取出固定(**-20?C固定10~20min),再進(jìn)行免疫染色。–蓋片的處理方法同載玻片的處理,但泡酸時(shí)間2h即可。–為了防止細(xì)胞脫片,可用多聚賴氨酸處理。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞涂片·大多數(shù)細(xì)胞涂片由細(xì)胞懸液制成,包括:–血液、尿液、腦脊液;–體腔積液;–組織穿刺吸取,如骨髓、淋巴結(jié)或其他實(shí)質(zhì)性組織–懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或貼壁細(xì)胞經(jīng)消化后形成的懸液。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞涂片(續(xù))·細(xì)胞涂片的方法:–手涂法·將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)到106/ml左右,可直接涂于載玻片上,但要均勻、不重疊?!D片范圍應(yīng)小于1cm直徑,以節(jié)約試劑。–涂片機(jī)涂片法·將細(xì)胞樣品制成2×105~6/ml細(xì)胞懸液,吸取50~100?l(1~2×104~5cells)加入涂片機(jī)內(nèi),1000rpm離心2min后細(xì)胞就均勻分布于玻片上,上海多標(biāo)記免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù),上海多標(biāo)記免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)常用染色方法根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法、免疫酶標(biāo)法、親和組織化學(xué)法。
多重?zé)晒饷庖呓M化與顯色法多重免疫組化不同,多重?zé)晒饷庖呓M化(mIHC)是基于酪胺信號放大( Tyramide Signal Amplification,TSA)技術(shù),可實(shí)現(xiàn)在同一組織切片樣本上對多個靶標(biāo)進(jìn)行區(qū)別標(biāo)記,進(jìn)而分析組織微環(huán)境中蘊(yùn)含的復(fù)雜信息。 多靶標(biāo)組織原位的定位,半定量分析,數(shù)據(jù)更有價(jià)值高清共染圖片,助力高水平文章發(fā)表大幅提升低豐度蛋白的檢出幾率節(jié)省抗體用量,節(jié)約寶貴時(shí)間同一來源種屬抗體的多重標(biāo)記,無需更換經(jīng)典克隆節(jié)約珍貴樣本,小切片提供大信息。
我身邊有個研究生同學(xué)在我們實(shí)驗(yàn)室初次涉入免疫組化,聽說步驟不難,跟我后面做了幾次之后,就自己開始做了,連續(xù)做了三次,結(jié)果均是陰性染色。很掃興,不知是什么原因?qū)е碌?,后來我還是請教了上海舜田生物老師,她**提供給我我很大的幫助,解決問題的思路也逐步清晰。問題及其解答:免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些?1、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯誤。不知抗體是進(jìn)口的還是國產(chǎn)的工作液,怎么這么高稀釋度也沒能做出陽性結(jié)果?另外,不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果,抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng),必須摸索比較好濃度。2、抗原修復(fù)不全,對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位,以利于與抗體結(jié)合;建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實(shí)驗(yàn),這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行,還可高壓修復(fù)。3、組織切片本身這種抗原含量低;4、血清封閉時(shí)間過長。5、DAB孵育時(shí)間過短。6、細(xì)胞通透不全,抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。7、開始做免疫組化,我建議你一定要首先做個陽性對照片,排除抗體等外的方法問題。我的實(shí)際解決方案:1、首先,排除組織切片內(nèi)的抗原有無丟失及其含量多少。免疫組化中兩個**重要的因素是抗原和抗體。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/309950.html
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