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產(chǎn)品關鍵詞:天津非編碼RNA 熒光定量PCR課題承包
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詳細說明
有關轉(zhuǎn)基因及其產(chǎn)品的安全性的爭論在國內(nèi)外愈演愈烈,各國**紛紛出臺一系列的政策、法規(guī),天津非編碼RNA 熒光定量PCR課題承包,要求對轉(zhuǎn)基因作物進行標識,有些國家對轉(zhuǎn)基因的比較低含量做了限定,其閾值大小從1-5%不等。這就要求必須對轉(zhuǎn)基因及其產(chǎn)品進行檢測。 常規(guī)的檢測方法多采用PCR法,如PCR-凝膠電泳、PCR-ELISA等。這些方法普遍存在著PCR產(chǎn)物污染,天津非編碼RNA 熒光定量PCR課題承包、特異性不高及速度慢等問題。熒光PCR技術是一種新近發(fā)展起來的檢測技術,它的應用將從根本上解決這些問題。 1.收集了國內(nèi)外商品化的轉(zhuǎn)基因作物品種,并通過查閱有關文獻及網(wǎng)站初步確定了各種作物的轉(zhuǎn)基因構建圖; 2.于反應體系中引入UNG去污染酶,建立了無污染熒光PCR擴增體系; 3.以植物內(nèi)源基因18SrRNA為靶標,設計了特異性引物和熒光探針,建立了以18SrRNA基因的擴增與否來判斷核酸提取質(zhì)量好壞的方法; 4.以FAM熒光素為標記,建立了以35S,天津非編碼RNA 熒光定量PCR課題承包、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa為篩選目標的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物熒光PCR定性檢測體系; 5.分別以FAM和TET兩種熒光素標記外源基因和內(nèi)源基因,建立了轉(zhuǎn)基因大豆及轉(zhuǎn)基因玉米的熒光定量PCR檢測體系。
Ct(閾值循環(huán))是擴增曲線與閾值線的交叉點(圖 1B)。它是 PCR 反應中靶標濃度的相對測量。除靶標濃度之外,還有很多因素會影響 Ct 的***值。我們將要討論最常見的可能影響 Ct 值的非模板依賴性因素,并描述如何評估實時熒光定量 PCR 反應的性能。
顯示實時反應擴增圖的幾個參數(shù)。圖 1B 中的**期對應于圖 1C 中的線性期。閾值必須設在擴增圖的線性期中。Ct 值隨模板量減少而增加。然而,反應混合物或儀器中的任何干擾,只要能影響與 Ct 計算相關的熒光測定,都會使 Ct 值產(chǎn)生非模板依賴性的變化。因此,在不同條件下或用不同試劑進行的 PCR 反應產(chǎn)生的 Ct 值不可以直接進行比較。
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段、熒光信號**擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈**級增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號**擴增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了幾個重要的概念:擴增曲線、熒光閾值、CT值。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/330932.html
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