《2016年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編》2016年收藏|手機(jī)打開手機(jī)客戶端打開本文大鼠橢圓囊感覺上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞系的建立劉俊黃海林吳佳源【摘要】：目的通過SV40T抗原在大鼠橢圓囊感覺上皮細(xì)胞(utricularsensoryepithelialcell,USEC)表達(dá),建立無限增殖細(xì)胞系(USEC-1),為毛***，北京*基因法細(xì)胞永生化實(shí)驗(yàn)承包、基因表達(dá)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究提供豐富細(xì)胞來源。方法取出生1d(postnatalday1,P1)大鼠的橢圓囊感覺上皮,嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)消化處理,胰酶+膠原酶消化,獲得具活性的純橢圓囊感覺上皮細(xì)胞。然后加入猿猴肉瘤***SV40(SimianVirus,SV40)轉(zhuǎn)染培養(yǎng),通過行態(tài)學(xué)及增殖能力的變化粗篩出USEC細(xì)胞,傳代培養(yǎng)。并通過顯微鏡及透射電鏡對(duì)細(xì)胞的行態(tài)、生長特征觀察;細(xì)胞角蛋白18、波形蛋白的表達(dá);RT-PCR檢測SV40T抗原;細(xì)胞計(jì)數(shù)分析USEC-1細(xì)胞的增殖能力;軟瓊脂糖培養(yǎng)、裸鼠致瘤試驗(yàn)來鑒定永生化細(xì)胞系USEC-1的特征。結(jié)果USEC-1細(xì)胞系保持了原代細(xì)胞的表形特征,呈扁平、多角形、核大而圓的上皮細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞之間連接緊密,形成單層時(shí)呈"鋪路石樣"外觀。可見由成百個(gè)SEC-1細(xì)胞包繞液體而成的dome。細(xì)胞角蛋白表達(dá)陽性，北京*基因法細(xì)胞永生化實(shí)驗(yàn)承包，北京*基因法細(xì)胞永生化實(shí)驗(yàn)承包,波形蛋白表達(dá)陰性。不同世代USEC-1均表達(dá)SV40T抗原。該系已培養(yǎng)6個(gè)月。

    原標(biāo)題：science揭秘：兩步過程就能導(dǎo)致細(xì)胞永生化和**利于細(xì)胞不死的突變對(duì)**的發(fā)展至關(guān)重要，但加利福尼亞大學(xué)伯克利分校的新研究表明，成為不朽的過程比原來想象的更為復(fù)雜。永生化的關(guān)鍵是一種稱為端粒酶的酶，可以使染色體在經(jīng)常分裂的細(xì)胞中保持健康。該酶延長染色體末端的帽或端粒，每個(gè)細(xì)胞分裂期間它們脫落。當(dāng)端粒太短時(shí)，端點(diǎn)相互粘連，細(xì)胞分裂時(shí)會(huì)造成破壞，大多數(shù)情況下會(huì)殺死細(xì)胞。20世紀(jì)80年代，加州大學(xué)伯克利分校的伊麗莎白·布萊克本（ElizabethBlackburn）和加州大學(xué)伯克利分校的卡羅爾·格里德（CarolGreider）和哈佛大學(xué)的約翰·索斯塔克（JohnSzostak）在染色體末端補(bǔ)充端粒酶及其作用，在2009年獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。由于端粒隨著細(xì)胞年齡的增長而縮短，科學(xué)家們認(rèn)為，通常不會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞的端粒酶，使得這些細(xì)胞無限期地保持長端粒，從而使*細(xì)胞（從未老化）變得永生化。估計(jì)有90％的惡性**使用端粒酶實(shí)現(xiàn)永生，各種提出的*****都側(cè)重于降低**中端粒酶的產(chǎn)生。新研究研究了使用基因組工程細(xì)胞在培養(yǎng)物中進(jìn)行的永生化過程，并且隨著皮膚細(xì)胞從痣進(jìn)化為惡性黑素瘤，這表明端粒酶在**中起著更為復(fù)雜的作用。

    人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞名稱：人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞；Hacat組織來源：永生化角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)條件：人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞MEM+15%FBS形態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣細(xì)胞來源：：該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶**正常皮膚，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽性。我們有細(xì)胞庫和專業(yè)實(shí)驗(yàn)室無菌操作，同時(shí)接受客戶復(fù)蘇、委托培養(yǎng)服務(wù)，并提供的科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。購買我司細(xì)胞的客戶請(qǐng)先與公司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的細(xì)胞株名稱、種屬、貨號(hào)、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞株說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。對(duì)于培養(yǎng)，只要我們細(xì)心操作，注意細(xì)節(jié)，并不是大家說的那樣困難。對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)和有條件的客戶，我們提供專人指導(dǎo)。對(duì)于無培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)和條件的客戶，建議由公司代為培養(yǎng)細(xì)胞及進(jìn)行后續(xù)研究。我司對(duì)每一位客戶追蹤服務(wù)，因材施教，對(duì)產(chǎn)品不僅售前負(fù)責(zé)，售后更負(fù)責(zé)。Cs-(004)-006801犬蝠皮膚細(xì)胞；GSnFBS1，規(guī)格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006802犬蝠肺細(xì)胞；GSnFBL2，規(guī)格：>5×100000cells/瓶Cs-(004)-006803三葉小蹄蝠皮膚細(xì)胞；STBS2，規(guī)格：>5×100000cells/瓶Cs-。

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