無論 Ct ***值是多少，任何能夠有效擴增和檢測起始模板拷貝數(shù)為 1 的系統(tǒng)都達到了靈敏度的極限。

如前文所述，效率是決定反應靈敏度的關(guān)鍵因素（圖 5），天津MiRNA 熒光定量PCR課題承包。在檢測極低拷貝數(shù)時的另一個重要的考慮因素是，不能預期模板為正態(tài)分布。相反，它會遵循泊松分布，該分布預測在平均包含一個拷貝的起始模板的大量重復中，實際上約 37% 不含拷貝，天津MiRNA 熒光定量PCR課題承包，*有約 37% 含有 1 個拷貝，天津MiRNA 熒光定量PCR課題承包，18% 應包含 2 個拷貝（見圖 9）。因此，為了可靠地檢測低拷貝，必須做大量的重復實驗來提供統(tǒng)計***性，以克服泊松分布的限制。

實時熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）指的是在PCR進行的同時，對其過程進行監(jiān)測的能力（即實時）。因此，數(shù)據(jù)可在PCR擴增過程中，而非PCR結(jié)束之后，進行收集。這為基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來了**性的變革。在實時熒光定量PCR (qPCR)中，反應以循環(huán)中***檢測到目標擴增的時間點為特征，而非在一定循環(huán)數(shù)后目標分子累計的擴增量。目標核酸的起始拷貝數(shù)越高，則會越快觀察到熒光的***增加。相反，終點法檢測（也稱 “讀板檢測”）測量的是PCR循環(huán)結(jié)束時累計的PCR產(chǎn)物量。

每個反應管內(nèi)的熒光信號到達設定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標**起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標**Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。同時，對于熒光PCR實驗來說，CT值也是判讀樣品陰陽性的重要指標。

大量的熒光定量PCR研究資料表明，病原體數(shù)量與***性疾病病情的輕重程度、傳染性及***效果均有相關(guān)性。因此，通過熒光定量PCR方法得到的檢測結(jié)果，一定程度上可以準確反映疾病***的情況。

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