為了正確地評估 PCR 效率，至少需要 3 次重復和至少 5 個數(shù)量級倍數(shù)的模板濃度。圖 6 說了建議此精確級別的理由，它證明在 1 個數(shù)量級倍數(shù)與 5 個數(shù)量級倍數(shù)范圍內(nèi)測試稀釋模板時，獲得的斜率或效率可能產(chǎn)生數(shù)學偏差。因此，即使檢測 ** 有效，由于每個稀釋點都存在標準差，北京**基因熒光定量PCR檢測服務，北京**基因熒光定量PCR檢測服務，檢測一個數(shù)量級倍數(shù)的連續(xù)稀釋時，可能獲得 70 至 170% 的范圍。在 5 個數(shù)量級倍數(shù)范圍內(nèi)做相同數(shù)量的稀釋點或重復，可能的偏移只有 ±8%。這意味著在 5 個數(shù)量級倍數(shù)范圍內(nèi)，如果效率為 94%，北京**基因熒光定量PCR檢測服務，則該實驗的效率范圍介于 88% 到 ** 之間。為了準確測定 PCR 反應的效率，必須進行 5 個數(shù)量級倍數(shù)的連續(xù)稀釋。-3.3 ±10% 的斜率意味著效率達到 ** ±±10%。PCR 反應效率越低，那么靈敏度越低。

使用可高壓處理的移液器，由于移液器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本 DNA 的污染，因此要使用可高壓處理的移液器 。嚴格按照試驗的分區(qū)進行操作，按照提取區(qū)、擴增區(qū)、檢測區(qū)單方向流動，物品、樣品和試劑不可逆向流動 。操作多份樣品時，制備反應混合液，先將熒光 PCR 反應液、熒光探針和酶混合好，然后分裝到每個 PCR 管中，這樣即可以減少操作次數(shù)，避免污染，又可以增加反應的精確度 。加樣品、加蛋白酶 K 和加樣品過程中，特別注意防止樣品的交叉污染和酶的降解   。操作時設立陰性及陽性對照，可驗證熒光 PCR反應的準確性和可信性

SNP基因分型技術(shù)原理是PCR擴增含有SNP的基因組片段，主要特點是準確性高、靈活性強、通量大，主要方法是TaqMan探針法。TaqMan探針法 針對染色體上的不同SNP位點分別設計PCR引物和TaqMan探針，進行實時熒光PCR擴增。探針的5’-端和3’-端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。當溶液中存在PCR產(chǎn)物時，該探針與模板退火，即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物，從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來，破壞兩熒光分子間的PRET，發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點分析。

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