純度檢測

  RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。

  變性瓊脂糖凝膠電泳測定

  制膠

  1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)，江蘇食品安全熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。

  灌制凝膠板，預(yù)留加樣孔至少可以加入25 μl溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內(nèi)，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個(gè)毫米。

  準(zhǔn)備RNA樣品

  取3μgRNA，加3倍體積的甲醛上樣染液，加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10μg/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。

  電泳

  上樣前凝膠須預(yù)電泳5min，江蘇食品安全熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，隨后將樣品加入上樣孔，江蘇食品安全熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。5–6V/cm電壓下2h，電泳至溴酚蘭指示劑進(jìn)膠至少2–3cm。

  紫外透射光下觀察并拍照

有關(guān)轉(zhuǎn)基因及其產(chǎn)品的安全性的爭論在國內(nèi)外愈演愈烈，各國**紛紛出臺一系列的政策、法規(guī)，要求對轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行標(biāo)識，有些國家對轉(zhuǎn)基因的比較低含量做了限定，其閾值大小從1-5％不等。這就要求必須對轉(zhuǎn)基因及其產(chǎn)品進(jìn)行檢測。 常規(guī)的檢測方法多采用PCR法，如PCR-凝膠電泳、PCR-ELISA等。這些方法普遍存在著PCR產(chǎn)物污染、特異性不高及速度慢等問題。熒光PCR技術(shù)是一種新近發(fā)展起來的檢測技術(shù)，它的應(yīng)用將從根本上解決這些問題。 1.收集了國內(nèi)外商品化的轉(zhuǎn)基因作物品種，并通過查閱有關(guān)文獻(xiàn)及網(wǎng)站初步確定了各種作物的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建圖； 2．于反應(yīng)體系中引入U(xiǎn)NG去污染酶，建立了無污染熒光PCR擴(kuò)增體系； 3．以植物內(nèi)源基因18SrRNA為靶標(biāo)，設(shè)計(jì)了特異性引物和熒光探針，建立了以18SrRNA基因的擴(kuò)增與否來判斷核酸提取質(zhì)量好壞的方法； 4．以FAM熒光素為標(biāo)記，建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa為篩選目標(biāo)的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物熒光PCR定性檢測體系； 5．分別以FAM和TET兩種熒光素標(biāo)記外源基因和內(nèi)源基因，建立了轉(zhuǎn)基因大豆及轉(zhuǎn)基因玉米的熒光定量PCR檢測體系。

所說的PCR應(yīng)該就是**常規(guī)的PCR，以DNA為模板，通過上下游引物，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增。

2、RT-PCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription），盡管有些資料上說實(shí)時(shí)熒光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也簡稱RT-PCR，但是這是不對的，不推薦。

基本操作過程是將所提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，然后將所獲得的cDNA作為模板，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，是一種檢測基因表達(dá)的常用方法。

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR也就是Real-Time PCR，其比較大的作用是檢測樣品中的初始DNA濃度。

至于三者的關(guān)系，RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR應(yīng)該都屬于PCR，在RNA實(shí)驗(yàn)中，這二者都會應(yīng)用到

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