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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京非編碼RNA 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time PCR)技術(shù)是在PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù),它是通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),然后利用熒光信號的積累強(qiáng)弱實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知的DNA模板進(jìn)行定量,實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,北京非編碼RNA 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),為快速準(zhǔn)確地分析樣本中的各類待檢物質(zhì)提供了嶄新的技術(shù)工具,現(xiàn)在已被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室及臨床**標(biāo)志物的檢測。Real-Time PCR與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比其使用了熒光探針標(biāo)記特定核酸從而提高了準(zhǔn)確性;靈敏度提高故使用較少的樣本量,從而減少了樣本消耗殆盡的風(fēng)險(xiǎn),在一小時(shí)左右即可出結(jié)果,簡化了傳統(tǒng)PCR方法;全封閉管分析、利用電腦分析軟件對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的檢測和自動(dòng)定量,北京非編碼RNA 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),北京非編碼RNA 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),定量動(dòng)態(tài)范圍高達(dá)五個(gè)數(shù)量級,且結(jié)果重現(xiàn)性較好,這也提高了檢測的靈敏度和精密度。
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SYBR Green I法:SYBR Green I是一種具有綠色激發(fā)波長的染料,比較大吸收波長約為 497 nm,發(fā)射波長比較大約為 520 nm,可以和所有的 dsDNA 雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合。因?yàn)樵谟坞x狀態(tài)下 SYBR Green I 發(fā)出的熒光較弱,但是當(dāng)它與雙鏈 DNA 結(jié)合后,熒光就會**增強(qiáng),而且熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。此法的優(yōu)點(diǎn)是它可以監(jiān)測任何 dsDNA 序列的擴(kuò)增,檢測方法較為簡單,成本較低,但也正是由于熒光染料能和任何dsDNA 結(jié)合,如非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體也能與染料結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號,使實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生假陽性結(jié)果,因此其特異性不如探針法。因?yàn)榉翘禺愋援a(chǎn)物和引物二聚體的變性溫度要比目標(biāo)產(chǎn)物的低,所以可以在熔解曲線反應(yīng)過程中利用軟件分析儀器收集到信號進(jìn)行鑒別
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/355876.html
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