但不能讓它們一直具有較長(zhǎng)的長(zhǎng)度和保持健康。如果細(xì)胞未能增加端粒酶表達(dá)，那么它們也不能永生化，并且**終因端粒變短而死亡，這是因?yàn)槿旧w連接在一起，在細(xì)胞分裂時(shí)會(huì)破碎。具有這種TERT啟動(dòng)子突變的細(xì)胞更可能上調(diào)端粒酶，這就使得它們盡管具有非常短的端粒，但仍能繼續(xù)生長(zhǎng)。不過，Hockemeyer說，端粒酶水平是較低的，結(jié)果就是一些未受保護(hù)的染色體末端在存活的突變細(xì)胞中出現(xiàn)，這可能導(dǎo)致突變和進(jìn)一步促進(jìn)**形成。Hockemeyer說，“在我們的論文發(fā)表之前，人們可能認(rèn)為在TERT啟動(dòng)子中*獲得這一個(gè)突變就足以使細(xì)胞永生化，以及當(dāng)這種情形在任何時(shí)候發(fā)生時(shí)，端?？s短就被消除。我們證實(shí)這種TERT啟動(dòng)子突變不能立即足以阻止端?？s短?！比欢匀徊磺宄?*終是什么導(dǎo)致端粒酶上調(diào)表達(dá)，從而使得細(xì)胞發(fā)生永生化。Hockemeyer說，它不可能是另一個(gè)突變，而是影響端粒酶基因表達(dá)的表觀遺傳變化，或轉(zhuǎn)錄因子或其他的結(jié)合到端粒酶基因上游啟動(dòng)子上的調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)的變化，上海細(xì)胞永生化實(shí)驗(yàn)服務(wù)，上海細(xì)胞永生化實(shí)驗(yàn)服務(wù)，上海細(xì)胞永生化實(shí)驗(yàn)服務(wù)。“然而，我們有證據(jù)證實(shí)，第二步必須發(fā)生，而且是在端粒的長(zhǎng)度縮短至一個(gè)臨界值時(shí)發(fā)生的，在這時(shí)，端粒是功能故障的，并且導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定?！被叵肫饋?。

    端粒在*前期細(xì)胞中很短，因?yàn)槎肆Ｃ竸偤米銐蚓S持而不延長(zhǎng)端粒。“我們的發(fā)現(xiàn)調(diào)和了有關(guān)攜帶這些突變的**的相互矛盾的信息，”霍克邁耶說。該發(fā)現(xiàn)還解決了另一個(gè)**近的直覺性發(fā)現(xiàn)：端粒較短的人更能抵抗黑色素瘤。他說，原因是如果一個(gè)TERT啟動(dòng)子突變會(huì)引起*前病變-痣或痣-向黑色素瘤，那么在端粒短的人中，在細(xì)胞死亡之前死亡的機(jī)會(huì)會(huì)更大，才能調(diào)節(jié)端粒酶和使細(xì)胞永生化。該研究還涉及從人多能干細(xì)胞分化的細(xì)胞工程化TERT啟動(dòng)子突變。結(jié)果與在UCSF的HelenDiller家族綜合**中心的患者中獲得的人類皮膚損傷中觀察到的進(jìn)展相同，并在Bastian指導(dǎo)的臨床**基因組學(xué)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行研究檢查。原標(biāo)題：.,"MutationsinthepromoterofthetelomerasegeneTERTcontributetotumorigenesisbyatwo-stepmechanism,"Science(2017).1126/返回搜狐。

virus基因轉(zhuǎn)染法

很多virus轉(zhuǎn)染能夠誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，例如EBvirus(epstein-barr virus, EBV)、猿猴virus40 (simian virus40, SV40)和人**瘤virus(human papillomavirus, HPV)。這些virus轉(zhuǎn)染其天然宿主細(xì)胞，能誘導(dǎo)細(xì)胞永生化。

EBV能使B淋巴母細(xì)胞永生化形成淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系，它是通過潛伏蛋白activate細(xì)胞因子與其受體相互作用的途徑使細(xì)胞永生的。EBV永生化B細(xì)胞的一個(gè)**明顯的特點(diǎn)是端粒酶活性的提高，這可能是導(dǎo)致B細(xì)胞永生的主要原因。目前，EBvirus介導(dǎo)的細(xì)胞永生化應(yīng)用**多的是B淋巴細(xì)胞，其他細(xì)胞中的應(yīng)用很少。

SV40是簡(jiǎn)單的真核細(xì)胞virus，SV40的T抗原片段是**常用的目的片段，將其整合入靶細(xì)胞核內(nèi)并表達(dá)，可導(dǎo)致細(xì)胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與**相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型。應(yīng)用的方法包括：野生型SV40virus共培養(yǎng)轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄virus載體法等。

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