RNA提取注意事項（4）

消除環(huán)境RNase的污染

為了得到完整的、***RNA，在整個RNA制備過程中，當RNA離開強蛋白變性劑（如離液裂解液或酚）的保護時，避免引入新的RNase污染就非常關鍵。由于RNase幾乎是無所不在，所以必須確保與純化的RNA接觸的每一樣東西都是無RNase污染的。所有的表面，包括移液器，上海 RNA提取試劑盒50T/690元QQ 804036498、工作臺、玻璃器皿和制膠設備，都必須用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來處理過，去除各種溶液或者反應緩沖液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe，上海 RNA提取試劑盒50T/690元QQ 804036498，上海 RNA提取試劑盒50T/690元QQ 804036498。必須保證一直使用無RNase的移液器頭、試管和溶液，手套也應經常更換。

溶液 RL應在2-8℃避光保存，其他溶液和純化柱室溫保存。

注意事項

●  嚴防操作環(huán)境、使用的容器、耗材和試劑的RNase污染。操作過程中勤換手套。

●  使用本產品提取的RNA一般不含有DNA污染。在極少數(shù)情況下(與組織pH值等相關)，如果有DNA污染而又必須去除，則可以用RNase-free的DNase處理樣品。

●  請嚴格遵照操作步驟操作。

●  不同起始材料試劑用量及預期RNA產率。

***次使用前應在溶液 RPI、溶液 RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶子上的標簽。

RNA 降解可能的原因如下：

組織取出后沒有馬上進行處理或冷凍，導致 RNase 的釋放降解樣品中的RNA。

貼壁細胞在胰蛋白酶處理時被破壞。

樣本量太大而加入的 Trizol 液少，導致裂解不完全，不能有效*** RNase的活性，進而導致 RNA 降解。

提取過程中使用的溶液、離心管或***頭未經 RNase 去除處理。

RNA 沉淀沒有保存于-80°C。

RNA 電泳時的電泳液及電泳槽中含有 RNase，或者電泳時電泳液溫度過高， 造成 RNA 樣品被降解。

樣品中蛋白和多糖含量高，建議加入氯仿之前先高速離心去除蛋白和多糖。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/362017.html