微滴式數(shù)字PCR技術(shù),是將樣本通過微滴發(fā)生器進(jìn)行微滴化處理,制成約2104個1nL體積的微滴后進(jìn)行PCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)結(jié)束后,使用微滴檢測器對每個微滴逐個檢測,**終經(jīng)分析軟件計(jì)算出目標(biāo)DNA分子的濃度(copies/L)[2]。本研究選擇人mtDNA兩個編碼基因ND4和16SrRNA，上海高靈敏數(shù)字PCR定量檢測，上海高靈敏數(shù)字PCR定量檢測，上海高靈敏數(shù)字PCR定量檢測,設(shè)計(jì)特異性引物與探針,與檢測樣本制成反應(yīng)混合液,運(yùn)用微滴式數(shù)字PCR技術(shù),檢測陽性反應(yīng)的微滴并計(jì)數(shù),達(dá)到同時(shí)進(jìn)行種屬鑒定和***定量的目的。1材料與方法1.1樣本制備1.1.1人mtDNAND4基因片段重組質(zhì)粒的制備和稀釋根據(jù)人mtDNAND4基因全長參考序列

全自動定量Western系統(tǒng)自動上樣 ，電泳分離、抗體孵育、化學(xué)發(fā)光、數(shù)據(jù)分析，可相對定量分析也可***定量分析。無需制膠、無需轉(zhuǎn)膜、 重復(fù)性好、真正定量、 快速靈敏， 所需的樣本量極少（樣品量只需3-5ul），整個實(shí)驗(yàn)的時(shí)間很短（只需把樣本、一抗等試劑加入微孔板中，3個小時(shí)左右出具檢測結(jié)果），即使在不同實(shí)驗(yàn)室，不同的實(shí)驗(yàn)操作者，得到的結(jié)果一致性也很好（每種靶蛋白的CV值不超過10%），檢測靈敏度高（可檢測低至pg級），無需轉(zhuǎn)膜可檢測大分子量蛋白（蛋白分子量可達(dá)400KD)，數(shù)據(jù)***：自動輸出目標(biāo)蛋白的分子量、峰面積、蛋白濃度等分析數(shù)據(jù)，印跡圖片清晰美觀。

數(shù)字PCR是一種核酸分子***定量技術(shù)。是一個在模板DNA、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)，擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異結(jié)合。相較于qPCR，BIOG數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的***定量。

PCR已經(jīng)成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域中**常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法之一。PCR是用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。PCR的比較大特點(diǎn)，是能將微量DNA大量擴(kuò)增

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