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使用的玻片等載體,都必須厚度均勻,北京多色熒光免疫組化,無(wú)明顯的自發(fā)熒光,如果使用油鏡,北京多色熒光免疫組化,還必須保證鏡油為無(wú)熒光鏡油;電源比較好裝穩(wěn)壓器,否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命,也會(huì)影響鏡檢的效果。3、免疫組化和免疫熒光結(jié)果分析:見(jiàn)***場(chǎng)試驗(yàn)講座。案例一DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景:奧運(yùn)會(huì)期間我們課題組研究生都在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn),許多從北京購(gòu)買(mǎi)的試劑買(mǎi)不到,對(duì)我們的許多實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的SP三步法染色試劑盒,效果不錯(cuò),在奧運(yùn)會(huì)期間我準(zhǔn)備做同批實(shí)驗(yàn)分不同批次酶免疫組化實(shí)驗(yàn),***批組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果很好,抗體濃度感覺(jué)比較合適(SantaCruz公司1:200),等做第二批時(shí)發(fā)現(xiàn)封閉血清不夠了,為了保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行,我又從福州邁新頂了一個(gè)SP試劑盒,同時(shí)抗體稀釋液也不夠了,我又重新從博士德公司買(mǎi)了一小瓶10ml。從第二批實(shí)驗(yàn)開(kāi)始,組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果一直顯示強(qiáng)背景著色,特異性染色很難辨別。后來(lái)我將標(biāo)本拿到上海舜田生物去做,北京多色熒光免疫組化,做了效果很不錯(cuò),于是我就請(qǐng)教了他們公司從事病理30多年經(jīng)驗(yàn)的老師,她告訴我應(yīng)該如何去分析和解決問(wèn)題,很快我就找到了思路,結(jié)果問(wèn)題終于解決了。
9、堿性磷酸酶堿性磷酸酶(AKP),又稱(chēng)堿性磷酸單酯酶,是酶組織化學(xué)中**常用的酶之一。分布***,常見(jiàn)于活躍運(yùn)輸?shù)哪ど?。該酶在堿性環(huán)境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解,**適pH為,可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所***;**物、碘液、砷酸鹽等可***其活性。顯示AKP的方法很多,主要有鈣鈷法和同時(shí)偶聯(lián)法。前者所需試劑便宜,容易購(gòu)買(mǎi),操作簡(jiǎn)單,但會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。后者方法較靈敏,而且在正常組織內(nèi)不存在萘酚,因此不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性,但所需試劑較難購(gòu)買(mǎi)。10、生物素(biotin)生物素是B族維生素之一。生物素在羧化、脫羧和轉(zhuǎn)羧化反應(yīng)中起輔酶作用。生物素是含硫水溶性維生素。廣布于動(dòng)物及植物組織,已從肝提取物和蛋黃中分離,是多種羧化酶輔基的成分。生物素標(biāo)記反應(yīng)簡(jiǎn)單、溫和且很少***抗體活性,生物素標(biāo)記的抗體可存放多年而不失活。能與生物素結(jié)合的二級(jí)試劑素,所需的各種標(biāo)記物均可購(gòu)置。此外,親和素和鏈霉親和素的結(jié)合背景水平非常低,結(jié)合緊密且快速,抗體很容易與經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的活化生物素結(jié)合。生物素又可以與結(jié)合有酶、熒光染料的親和素或鏈霉親和素連接,后者已有商品試劑供應(yīng)。這樣只需將純化抗體與生物素結(jié)合,就可用各種不同的標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)。
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫熒光法【原理】·用于免疫熒光的標(biāo)記物是小分子的熒光素,可標(biāo)記抗體或抗原;免疫熒光技術(shù)·熒光素經(jīng)某種特定波長(zhǎng)的光照射激發(fā)后,能發(fā)射出一種比激發(fā)光波波長(zhǎng)更長(zhǎng)而且能量較低的熒光,籍此可作定位觀察或示蹤;·借助于熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。1、常用的熒光素·(1)異硫氰酸熒光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)·(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TetramethylRhodamineIsothiocyanate,TRITC)·(3)四乙基羅丹明(RB200)·(4)碘化丙啶(propidiumiodide,PI)(1)異硫氰酸熒光素(FITC)·易溶于水和乙醇?!け容^大吸收光譜為490~495nm,比較大發(fā)射光譜為520~530nm.呈翠綠色熒光,分子量。·在堿性條件下,F(xiàn)ITC的異硫氰酸基在水溶液中與Ig的自由氨基形成共價(jià)鍵,成為標(biāo)記的熒光抗體。一個(gè)lgG分子上**多能標(biāo)記15~20個(gè)FITC分子。(2)四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)·比較大吸收光譜550nm,比較大發(fā)射光譜620nm,呈紅色熒光,分子量為444?!づc蛋白質(zhì)結(jié)合的方式同F(xiàn)ITC。(3)四乙基羅丹明(RB200)·不溶于水,易溶于乙醇和**?!け容^大吸收光譜為570nm,比較大發(fā)射光譜為595~600nm,呈橙紅色熒光,分子量為580。·RB200在五氯化磷(PCl5)作用下轉(zhuǎn)變成磺酰氯(SO2Cl)。
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/382291.html
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