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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京新手RNA提取試劑盒50T/690元
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詳細(xì)說明
. 樣品處理a,北京新手RNA提取試劑盒50T/690元. 植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。b. 動(dòng)物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。c. 貼壁細(xì)胞:直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細(xì)胞,北京新手RNA提取試劑盒50T/690元,每106細(xì)胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。d. 細(xì)胞懸液:離心收集細(xì)胞。每106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml裂解液混勻。e. 血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細(xì)胞裂解液,北京新手RNA提取試劑盒50T/690元,混勻后室溫放置10分鐘, 10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細(xì)胞,可加入2倍體積紅細(xì)胞裂解液重復(fù)裂解步驟。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。
樣品勻漿后,加入氯仿前,可在-80°C 凍存放置一個(gè)月。
RNA 沉淀可以保存在 75%乙醇中,2-8°C 放置一周或-20°C 放置一年。
該試劑盒***于專業(yè)人員的科學(xué)研究使用,不得用于臨床診斷或***,更不得用于食品或藥品中。
實(shí)驗(yàn)步驟、細(xì)胞裂解或組織勻漿:
a貼壁細(xì)胞:吸盡培液,按照比例加入 Trizol 消化細(xì)胞,即每 10 平方厘米細(xì)胞中加入 1 ml Trizol,六孔板每孔加 1 ml Trizol,12 孔板每孔加 0.5 ml Trizol?;蝿?dòng) 3-5 下,再用移液器反復(fù)吹打幾下,確保細(xì)胞全部裂解,然后將溶液轉(zhuǎn)移至離心管中?!咀ⅰ考尤?Trizol 量不足時(shí),會(huì)導(dǎo)致 DNA 污染。
RNA 完整性檢測(cè)
取 1 μl RNA 加入適當(dāng) RNA loading buffer,混勻,進(jìn)行電泳檢測(cè)。若出現(xiàn)清晰的三條帶,分別為 28S、18S 和 5S,且條帶之間界限清晰,就證明 RNA 樣品的完整性非常好??蓞⒖家韵聢D示:
RNA 純度檢測(cè)
利用分光光度計(jì)或者NanoDrop 儀檢測(cè)RNA 樣品在260nm、280nm 處的OD 值, 并計(jì)算 A260/A280 的比值。純的 RNA 的比值應(yīng)在 2.0 左右。
提取到的 RNA 得率很低??赡艿脑蛉缦拢?
樣品裂解或勻漿處理不徹底。
RNA 沉淀?xiàng)l件和時(shí)間太短,沒有充分沉淀 RNA 造成 RNA 損失。
***得到的 RNA 沉淀未完全溶解。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/382800.html
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