在分子生物學領(lǐng)域的研究應(yīng)用

用于單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測分析：人們對疾病的易感性和對同一種******同一種疾病的效果是有差異性的，天津siRNA熒光定量PCR實驗技術(shù)服務(wù)，遺傳物質(zhì)DNA的多態(tài)性RELP，天津siRNA熒光定量PCR實驗技術(shù)服務(wù)，天津siRNA熒光定量PCR實驗技術(shù)服務(wù)，STR，ABO血型和SNP是個體差異的遺傳基礎(chǔ)。SNP在人類基因組中***存在，是人類可遺傳變異中**常見的一種，在遺傳性疾病的研究中具有重要意義

DNA甲基化檢測：DNA甲基化是表觀遺傳學重要的標記信息，通過實時熒光定量PCR技術(shù)獲得基因組甲基化水平數(shù)據(jù)對表觀遺傳學的時空特異性研究具有重要意義

管家基因反應(yīng)體系： 序號 反應(yīng)物 劑量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 內(nèi)參照上游引物F 0.5μl 3 內(nèi)參照下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 待測樣品cDNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 總體積 50μl 輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

  制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。 針對每一需要測量的基因，選擇一確定表達該基因的cDNA模板進行PCR反應(yīng)。

  反應(yīng)體系： 序號 反應(yīng)物 劑量 1 10×PCR緩沖液 2.5 ul 2 MgCl2溶液 1.5 ul 3 上游引物F 0.5 ul 4 下游引物R 0.5 ul 5 dNTP混合液 3 ul 6 Taq聚合酶 1 ul 7 cDNA 1 ul 8 加水至總體積為 25ul 輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

  35個PCR循環(huán)(94℃1分鐘;55℃1分鐘;72℃1分鐘); 72℃延伸5分鐘。

  PCR產(chǎn)物與 DNA Ladder在2%瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，檢測PCR產(chǎn)物是否為單一特異性擴增條帶。

  將PCR產(chǎn)物進行10倍梯度稀釋: 設(shè)定PCR產(chǎn)物濃度為1×1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104幾個濃度梯度。 所有cDNA樣品分別配置實時定量 PCR反應(yīng)體系。

所說的PCR應(yīng)該就是**常規(guī)的PCR，以DNA為模板，通過上下游引物，實現(xiàn)DNA的擴增。

2、RT-PCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription），盡管有些資料上說實時熒光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也簡稱RT-PCR，但是這是不對的，不推薦。

基本操作過程是將所提取的RNA進行反轉(zhuǎn)錄，然后將所獲得的cDNA作為模板，設(shè)計引物進行擴增，是一種檢測基因表達的常用方法。

3、實時熒光定量PCR也就是Real-Time PCR，其比較大的作用是檢測樣品中的初始DNA濃度。

至于三者的關(guān)系，RT-PCR和實時定量PCR應(yīng)該都屬于PCR，在RNA實驗中，這二者都會應(yīng)用到

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