·免疫動(dòng)物時(shí)，將弗氏佐劑與抗原按體積1:1混合乳化后(油包水)注入動(dòng)物。–一般***注射時(shí)用完全佐劑乳化，第二次或第三次注射時(shí)用不完全佐劑或不用佐劑。佐劑與抗原乳化的方法·研磨法：適于制備大量的佐劑抗原–先將不完全佐劑加熱，??；緩緩滴入，邊滴邊按同一方向研磨，使菌體完全分散，天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)。–按同樣方法滴人抗原，每加一滴應(yīng)研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢，待抗原全部加人后，應(yīng)成為乳白色粘稠的油包水乳劑?！と秉c(diǎn)：研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大，對(duì)微量或難得抗原不宜采用。佐劑與抗原乳化的方法(續(xù))·注射器混合法–將等量的完全佐劑和抗原分別吸人兩個(gè)5ml注射器內(nèi)，然后插入三通管內(nèi)，交替推動(dòng)針管混勻，往復(fù)操作直至形成粘稠的乳劑為止?！?yōu)點(diǎn)：無菌操作，節(jié)省抗原或佐劑?！と秉c(diǎn)：不易乳化，時(shí)間長。佐劑與抗原乳化的方法(續(xù))·快速乳化法：利用超聲波粉碎器可快速乳化抗原和佐劑混合物。–將抗原和佐劑按所需量加入一離心管中，置于超聲波粉碎器上，粉碎頭浸入液面下，天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)，離瓶底，以免打碎離心管。–每次乳化10～15s，然后置冰箱lmin左右。反復(fù)乳化3～4次即可完全乳化，天津多標(biāo)記免疫組化染色服務(wù)。管內(nèi)殘余量800r/min離心5～10min收集。·優(yōu)點(diǎn)：簡單、快速、節(jié)省材料。

    9、堿性磷酸酶堿性磷酸酶（AKP），又稱堿性磷酸單酯酶，是酶組織化學(xué)中**常用的酶之一。分布***，常見于活躍運(yùn)輸?shù)哪ど?。該酶在堿性環(huán)境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解，**適pH為，可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所***；**物、碘液、砷酸鹽等可***其活性。顯示AKP的方法很多，主要有鈣鈷法和同時(shí)偶聯(lián)法。前者所需試劑便宜，容易購買，操作簡單，但會(huì)出現(xiàn)假陽性。后者方法較靈敏，而且在正常組織內(nèi)不存在萘酚，因此不會(huì)出現(xiàn)假陽性，但所需試劑較難購買。10、生物素（biotin）生物素是B族維生素之一。生物素在羧化、脫羧和轉(zhuǎn)羧化反應(yīng)中起輔酶作用。生物素是含硫水溶性維生素。廣布于動(dòng)物及植物組織，已從肝提取物和蛋黃中分離，是多種羧化酶輔基的成分。生物素標(biāo)記反應(yīng)簡單、溫和且很少***抗體活性，生物素標(biāo)記的抗體可存放多年而不失活。能與生物素結(jié)合的二級(jí)試劑素，所需的各種標(biāo)記物均可購置。此外，親和素和鏈霉親和素的結(jié)合背景水平非常低，結(jié)合緊密且快速，抗體很容易與經(jīng)過化學(xué)修飾的活化生物素結(jié)合。生物素又可以與結(jié)合有酶、熒光染料的親和素或鏈霉親和素連接，后者已有商品試劑供應(yīng)。這樣只需將純化抗體與生物素結(jié)合，就可用各種不同的標(biāo)記物來檢測。

    這方面我有慘痛教訓(xùn)，當(dāng)時(shí)我買的抗體稀釋液偏酸，結(jié)果背景一片黃（未見特異性染色），建議pH在。（中性及弱堿性條件（pH7-8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解）9）拍照有條件的話比較好立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序；應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查；防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡；檢查時(shí)間每次以1~2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色；激發(fā)光長時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象；所以**多不得超過2~3h；熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再啟用時(shí)，須待燈光充分冷卻后才能點(diǎn)燃。***中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開啟15-30分鐘后；標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。

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