[1]免疫組化分類編輯免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下：1.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察，天津多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù).當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光，天津多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù),從而可以確定組織中的抗原定位或定量.2.免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是免疫組織化學(xué)研究中**常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進行定位或定性研究．3.免疫膠體金技術(shù)就是用膠體金標(biāo)記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進行定性，天津多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究．[1]免疫組化作用編輯免疫組化標(biāo)本實驗所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。

    –用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5～25個分子的小肽。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)抗體(antibody,Ab)1、抗體的概念：免疫球蛋白·機體受到抗原刺激后，由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，被稱為抗體。–抗體主要存在于血清內(nèi)；–抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗體。–免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。2、免疫組化實驗中常用的抗體：單克隆抗體和多克隆抗體?！慰寺】贵w：是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備的。–特異性強、抗體產(chǎn)量高?！ざ嗫寺】贵w：是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。–特異性低，會產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。–多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機會。–抗原與抗體的結(jié)合，要求量保持一定比例，當(dāng)抗原或抗體過量時，是不能聚合成大顆粒。3、抗體的制備——多克隆抗體的制備·動物的選擇·佐劑(adjuvant)·免疫方法·免疫劑量·抗體效價的測定·放血或定期抽血。

    但也存在主次之分，出現(xiàn)問題了，需要通過先排除主要的，再依次排除次要的--這是衡量你對免疫組化原理掌握與否的關(guān)鍵所在。案例三石蠟切片免疫熒光染色呈陰性結(jié)果或非特異性結(jié)果背景：因?qū)嶒炐枰?，?008年07月04日初次做肝臟組織ZO-1（一種胞膜蛋白，緊密連接蛋白）免疫熒光染色，以前我對酶免疫組化非常熟悉，在丁香園子內(nèi)也有不少置頂貼和精華帖，但免疫熒光一直還沒做過（原理知道，但細(xì)節(jié)不太了解）。我先用石蠟切片做了5次，結(jié)果一直不理想（表現(xiàn)為未見特異性強染色）；近幾日，在舜田生物老師的幫助下，我又切了冰凍切片，做了2次，終于基本成功了。在這個過程中，我對免疫熒光染色技術(shù)有了全新的認(rèn)識，而前些天發(fā)出免疫熒光求助貼，回復(fù)的很少，所以有必要加強對免疫熒光方面的討論），不妥之處敬請指正。有人會問酶免疫組化做的好好的，為何要做免疫熒光？其實，這也是我以前思考的難題，現(xiàn)在我認(rèn)為可能胞膜蛋白含量不高，用普通免疫免疫組化可能做不出來，需要敏感的免疫熒光方法來進行蛋白檢測（我是看許多外文文獻都是這樣做的，因此選擇免疫熒光染色。

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