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詳細(xì)說明
已傳25代,傳代時(shí)間為5-6天,傳代比為1:2-3。USEC-1細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中能正常生長。軟瓊脂糖培養(yǎng)、裸鼠致瘤試驗(yàn)陰性。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功建立了大鼠橢圓囊上皮細(xì)胞永生化細(xì)胞系USEC-1,并進(jìn)行了初步的鑒定。本細(xì)胞系基本上保留了原代USEC細(xì)胞的表形特征,又不具有瘤細(xì)胞特征,可用于毛細(xì)胞分裂,江蘇HPV法細(xì)胞永生化專業(yè)定制、分化、再生及內(nèi)耳分子遺傳機(jī)制研究?!咀髡邌挝弧浚赫憬≈嗅t(yī)院【分類號(hào)】:R764下載全文更多同類文獻(xiàn)PDF全文下載CAJ全文下載(如何獲取全文?歡迎:購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式,AdobeReader*支持PDF格式【相似文獻(xiàn)】中國期刊全文數(shù)據(jù)庫**條1鄭貴亮;郭維;翟所強(qiáng);;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染前庭橢圓囊上皮細(xì)胞的影響因素[J];山東醫(yī)藥;2007年33期2楊仲昆;;人內(nèi)耳橢圓囊內(nèi)淋巴管瓣膜及其與橢圓囊管的關(guān)系[J];解剖學(xué)通報(bào);1965年03期3楊占泉;;美尼爾氏病橢圓囊和內(nèi)淋巴管的基底膜病理[J];國外醫(yī)學(xué),江蘇HPV法細(xì)胞永生化專業(yè)定制.耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè);1986年04期4;成纖維細(xì)胞生長因子受體在***鏈霉素?fù)p傷的成年鼠橢圓囊中的表達(dá)[J];國外醫(yī)學(xué)(耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè));1999年06期5賈宏博,于立身,江蘇HPV法細(xì)胞永生化專業(yè)定制,王奎年,戴建國,畢紅哲;橢圓囊和球囊在線加速度前庭知覺中的相互作用[J];中華航空醫(yī)學(xué)雜志;1996年04期6。
建株方法續(xù)4、棄上清液,再加6ml1640全培養(yǎng)液進(jìn)行第二次洗滌,離心1500轉(zhuǎn)15分鐘。5、棄上清液,加入2ml1640全培養(yǎng)基(全培養(yǎng)基加入前,置37度水浴10分鐘),然后加入環(huán)胞霉素A(4%)和,充分混勻后移入到25平方厘米的培養(yǎng)瓶,置37度,5%CO2培養(yǎng)箱中。6、每2-3天加入3ml新鮮配制的培養(yǎng)基(1MHEPES緩沖液;15%胎牛血清(FBS);1%青霉素和鏈霉素;PRMI1640補(bǔ)足到***)。7天左右鏡下觀察,可見淋巴細(xì)胞明顯增大,出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。7、如果細(xì)胞增長慢,或細(xì)胞密度低,或培養(yǎng)液pH值呈酸性,吸出半量培養(yǎng)液,進(jìn)行等量換液。8、當(dāng)總量達(dá)到14ml時(shí)轉(zhuǎn)移到75ml培養(yǎng)瓶中,每2-3周加入5-10ml新鮮培養(yǎng)基。9、約6-8周,當(dāng)總量達(dá)到45ml時(shí),置50ml離心管中,離心1500轉(zhuǎn),10分鐘。棄上清,加入3ml凍存培養(yǎng)基(5%二甲基亞楓(dimethylsufoxide),95%FBS)混勻,成細(xì)胞懸浮液。凍存管分裝,1ml/管,立即置零下80度,1-2小時(shí)后移入液氮罐中。
二、 建株方法
1、 取外周血3-4ml,肝素抗凝(血液室溫可放置48小時(shí)),應(yīng)用液濃度5u/ml,可加入5-10ml外周血。
2、 將血液與等量1640培養(yǎng)液混勻后,沿管壁漸漸加入到含有4ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管中(混合血:淋巴細(xì)胞分離液=6:4),3000轉(zhuǎn)離心10分鐘。
3、 吸取白細(xì)胞層,移入另一支離心管中,加入不含血清的1640培養(yǎng)液6ml,輕輕混勻,進(jìn)行***次洗滌。1500轉(zhuǎn)離心15分鐘。
4、 棄上清液,再加6ml1640全培養(yǎng)液進(jìn)行第二次洗滌,離心1500轉(zhuǎn)15分鐘。
5、 棄上清液,加入2ml1640全培養(yǎng)基(全培養(yǎng)基加入前,置37度水浴10分鐘),然后加入環(huán)胞霉素A(4%)和1.2mlEBV液/份,充分混勻后移入到25平方厘米的培養(yǎng)瓶,置37度,5%CO2培養(yǎng)箱中。
6、 每2-3天加入3ml新鮮配制的培養(yǎng)基(1.6% 1M HEPES 緩沖液;15%胎牛血清(FBS);1%青霉素和鏈霉素;PRMI 1640補(bǔ)足到**)。7天左右鏡下觀察,可見淋巴細(xì)胞明顯增大,出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/409798.html
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