Rn 值是由 Applied Biosystems? FAM? 染料的熒光除以 ROX 染料的熒光而計算得出的比率。因此，假定 FAM 染料產(chǎn)生的熒光信號保持不變，北京基因突變熒光定量PCR檢測服務(wù)，ROX 染料量越少，北京基因突變熒光定量PCR檢測服務(wù)，產(chǎn)生的 Rn 值就越高。這將導(dǎo)致 Rn 基線上升，以及隨后 ΔRn 的減少和 Ct 值的變化，北京基因突變熒光定量PCR檢測服務(wù)。通過降低 ROX 染料水平而得到不同 Ct 值，沒有對反應(yīng)的真實靈敏度產(chǎn)生任何影響，卻有著意想不到的后果。如圖 4 所示，降低 ROX 染料的濃度可能會增加 Ct 值的標(biāo)準差。標(biāo)準差越大，分辨靶濃度之間的細微區(qū)別的可信度就越低（參加下文的精確度一節(jié)）。

一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段、熒光信號**擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈**級增加，PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號**擴增階段，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個重要的概念：擴增曲線、熒光閾值、CT值。

RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。

  RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

  溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用***反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定

  先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

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