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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇七色免疫組化實驗服務(wù)
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因而乙醇固定時間不宜過長(2h內(nèi))。·乙醇使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應(yīng)強度。(3)其它固定劑·**:–對抗原性的保存好,但脫水性更強,較少用于組織標(biāo)本,但細胞爬片常用**固定。3、抗原修復(fù)——原因·常規(guī)的石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定,結(jié)果使得:–抗原性物質(zhì)形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇;–蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽?!ひ螅涸谌旧珪r,需要先進行抗原修復(fù)或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。3、抗原修復(fù)——方法·化學(xué)方法·加熱方法–水浴加熱法–微波照射法–高壓加熱法–酸水解法(1)化學(xué)方法·主要是通過一些酶的作用,使抗原決定簇暴露。常用的酶有:胰蛋白酶,江蘇七色免疫組化實驗服務(wù),江蘇七色免疫組化實驗服務(wù)、胃蛋白酶等。–胰蛋白酶:一般使用濃度為~,消化時間為37?C,10~40**要用于細胞內(nèi)抗原的顯示;–胃蛋白酶:一般使用濃度為~,江蘇七色免疫組化實驗服務(wù),消化時間為37?C、30~180**要用于細胞間質(zhì)抗原的顯示?!だ纾篖aminin、CollagenIV(2)水浴加熱法·將玻片放入裝有抗原修復(fù)液的容器中,加熱至沸騰,持續(xù)10~15分鐘。–優(yōu)點:操作簡單、經(jīng)濟,適用于所有的實驗室。
80年代到90年代相繼又有新的熒光素出現(xiàn)如R-藻紅朊、B-藻紅朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡中廣泛應(yīng)用。由于免疫熒光組織化學(xué)的特異性,快速性和在細胞水平定位的準(zhǔn)確性,已在免疫學(xué)、微生物學(xué)、病理學(xué)、**學(xué)以及臨床檢驗等許多方面得到廣泛應(yīng)用,日益發(fā)揮重要作用。[1]免疫組織化學(xué)技術(shù)現(xiàn)狀與展望編輯免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)經(jīng)過半個多世紀(jì)的不斷改進和創(chuàng)新,已成為現(xiàn)代研究生物和醫(yī)學(xué)的重要手段之一。由于免疫熒光技術(shù)與形態(tài)、機能相結(jié)合不斷完善和發(fā)展,尤其是合成了多種新熒光素與抗體容易結(jié)合,且結(jié)合物穩(wěn)定??梢院虵ITC結(jié)合進行免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)記或三標(biāo)記。至今,它已和親合化學(xué)技術(shù)如SPA、Biotin以及avidin、ConA相結(jié)合,應(yīng)用領(lǐng)域也日益擴大,又與現(xiàn)代的電子計算機、掃描電鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡、熒光***細胞分類器(FACS)以及數(shù)碼相機攝影技術(shù)的應(yīng)用,使得快速性、簡便性有了更大的提高,使得定量更加準(zhǔn)確。90年代又開展了熒光原位末端標(biāo)記和熒光原位雜交技術(shù),使得應(yīng)用范圍更廣。雖然免疫組織化學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展,如免疫金銀法、免疫膠體金法、SP、Evision二步法和CSA法,但由于它有自己獨特的優(yōu)點:特異性強。
TSA技術(shù)(Tyramide Signal Amplification?,酪胺信號放大技術(shù))是做多重免疫熒光染色的一種多快好省的方法,它使同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體,搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進行實驗,而且信號放大的倍數(shù)**增強。如果想要運用這個技術(shù),需要先做四個方面的準(zhǔn)備工作:嚴格驗證的高特異性抗體:所有CST的IHC-P驗證過的抗體都滿足mIHC(多重?zé)晒饷庖呓M化)高特異性的要求;HRP偶聯(lián)的針對一抗種屬亞型特異的二抗;酪胺熒光素(Perkin Elmer,Thermo Fisher Scientific等供應(yīng)商);多光譜成像系統(tǒng)(PerkinElmer等)。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/430316.html
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