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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇水體基因組熒光定量PCR課題承包
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熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),江蘇水體基因組熒光定量PCR課題承包,通過(guò)熒光信號(hào)不斷累積而實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR全程,然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中,江蘇水體基因組熒光定量PCR課題承包,對(duì)全程PCR擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè),根據(jù)反應(yīng)時(shí)間和熒光信號(hào)的變化可以繪制成一條曲線
Ct值:C**Cycle,江蘇水體基因組熒光定量PCR課題承包,t**threshold,Ct值的含義是每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)
熒光背景信號(hào)階段:在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)與背景無(wú)法區(qū)分,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化
熒光定量PCR(Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction,F(xiàn)Q-PCR;real-time quantitative PCR, RT-qPCR or qPCR), 是1996 年由美國(guó)Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,標(biāo)記**PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng),利用與之相適應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度 [1] 。
熒光域值(threshold)的設(shè)定:PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào),熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍
***定量:用已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣本的量進(jìn)行推算的方法為***定量法。此種方法需要明確標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度情況,然后稀釋標(biāo)準(zhǔn)樣品,分為幾個(gè)不同梯度濃度然后進(jìn)行反應(yīng)測(cè)試。橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值,縱坐標(biāo)為測(cè)得的Ct值,進(jìn)而繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)曲線為基礎(chǔ),在定量分析未知樣品過(guò)程中根據(jù)其ct值能夠?qū)悠鹗伎截悢?shù)推算出
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)總結(jié)為以下幾點(diǎn)。特異性強(qiáng) 靈敏度高 重復(fù)性好 檢測(cè)速度快 自動(dòng)化程度高
實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性高和精確性高的優(yōu)點(diǎn),此項(xiàng)技術(shù)已被應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域
文章來(lái)源地址: http://www.cdcfah.com/cp/432822.html
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