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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津lncRNA熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)
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詳細說明
每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線,其中橫坐標**起始拷貝數(shù)的對數(shù),縱坐標**Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù),天津lncRNA熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),天津lncRNA熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。同時,對于熒光PCR實驗來說,CT值也是判讀樣品陰陽性的重要指標。
大量的熒光定量PCR研究資料表明,病原體數(shù)量與***性疾病病情的輕重程度、傳染性及***效果均有相關(guān)性,天津lncRNA熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)。因此,通過熒光定量PCR方法得到的檢測結(jié)果,一定程度上可以準確反映疾病***的情況。
產(chǎn)生的 ΔRn 值也不同。請注意,熒光信號基線屬于非模板依賴性因素,兩種預(yù)混液的基線是不同的(圖 3A)。Ct 值的變化并沒有反映出反應(yīng)系統(tǒng)的整體性能(圖 3B)。靈敏度相當(dāng)?shù)念A(yù)混液產(chǎn)生的 Ct ***值可能不同。
使用預(yù)混液 A 和預(yù)混液 B 在等量的人類 gDNA 中進行 RNase P 擴增。(A) Rn 根據(jù)循環(huán)數(shù)進行繪制,并且顯示兩個反應(yīng)的基線。(B) 對數(shù) (ΔRn) 根據(jù)循環(huán)數(shù)進行繪制。兩種預(yù)混液的閾值(綠線)設(shè)定為相同水平。對于相同濃度的靶標而言,預(yù)混液 B 的 Ct 值 (CtB) 早于預(yù)混液 A 的相應(yīng)值 (CtA),表明預(yù)混液 B 的基線較低。使用 Applied Biosystems? 7500 實時熒光定量 PCR 系統(tǒng)執(zhí)行所有擴增。
SYBR Green I法:SYBR Green I是一種具有綠色激發(fā)波長的染料,比較大吸收波長約為 497 nm,發(fā)射波長比較大約為 520 nm,可以和所有的 dsDNA 雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合。因為在游離狀態(tài)下 SYBR Green I 發(fā)出的熒光較弱,但是當(dāng)它與雙鏈 DNA 結(jié)合后,熒光就會**增強,而且熒光信號的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。此法的優(yōu)點是它可以監(jiān)測任何 dsDNA 序列的擴增,檢測方法較為簡單,成本較低,但也正是由于熒光染料能和任何dsDNA 結(jié)合,如非特異性擴增產(chǎn)物和引物二聚體也能與染料結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號,使實驗產(chǎn)生假陽性結(jié)果,因此其特異性不如探針法。因為非特異性產(chǎn)物和引物二聚體的變性溫度要比目標產(chǎn)物的低,所以可以在熔解曲線反應(yīng)過程中利用軟件分析儀器收集到信號進行鑒別
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/437324.html
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