時(shí)間過長，會(huì)使熒光減弱?！っ看卧囼?yàn)時(shí)，需設(shè)置以下三種對照：–陽性對照：陽性血清+熒光標(biāo)記物–陰性對照：陰性血清+熒光標(biāo)記物–熒光標(biāo)記物對照：PBS+熒光標(biāo)記物?間接免疫熒光法的注意事項(xiàng)(續(xù))·標(biāo)本片需在操作的各個(gè)步驟中，始終保持濕潤，避免干燥。·一抗和二抗應(yīng)始終保持在標(biāo)本片上，天津七色免疫組化，避免因放置不平使液體流失，從而造成非特異性熒光染色。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫酶酶標(biāo)法【原理】·以酶作為標(biāo)記物與外加底物作用后產(chǎn)生不溶性色素，沉積于抗原和抗體反應(yīng)的部位；·酶降解底物的量與色澤濃度成正比。可反映被測定的抗原或抗體的量。1、常用的標(biāo)記酶及其顯色底物·辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)及底物·堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)及底物(1)辣根過氧化物酶(HRP)及底物·HRP是應(yīng)用**廣的一種酶，來源于植物辣根，由無色的酶蛋白和深棕色的鐵葉琳結(jié)合而成，分子量約40kDa，穩(wěn)定性好；·底物為過氧化物和供氫體(DH2)–過氧化物：常用過氧化氫和過氧化氫尿素。–供氫體：多用無色的還原型染料，通過反應(yīng)生成有色的氧化型染料，**常用的供氫體是DAB。DAB(二氨基聯(lián)苯胺)·DAB本身無色，反應(yīng)后呈棕色，天津七色免疫組化，不溶于水，天津七色免疫組化，不易褪色，電子密度高，**為常用。天津七色免疫組化

    ·若標(biāo)本自發(fā)熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光，陽性對照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光，則為特異性陽性染色。?直接免疫熒光法的注意事項(xiàng)(續(xù))·一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過3min，就有熒光減弱現(xiàn)象；·經(jīng)熒光染色的標(biāo)本比較好在當(dāng)天觀察，隨著時(shí)間的延長，熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸下降。(2)間接法又稱為熒光抗-抗體法?需要兩種抗體參與，即一抗和二抗(熒光素標(biāo)記)。一抗對標(biāo)本中的抗原來說起抗體的作用，但對熒光標(biāo)記的二抗來說又起著抗原作用。–可用來檢測標(biāo)本中未知抗原，也可檢測血清中未知抗體。?間接免疫熒光法操作步驟·標(biāo)本的處理及非特異染色的封閉同直接法；·一抗染色：–加未標(biāo)記的特異性抗體(通常1:100稀釋，用)，37?C作用30min或4?C過夜。·PBST漂洗5min×3次(震蕩漂洗)；?間接免疫熒光法操作步驟(續(xù))·加熒光標(biāo)記的二抗抗體，37?C濕盒避光作用30min?！BST避光漂洗5min×3次(例如包上錫紙，在搖床上漂洗)；·甘油緩沖液封片·鏡檢·優(yōu)點(diǎn)：敏感性較高，比直接法高10倍左右；制備一種熒光標(biāo)記抗體，可應(yīng)用于多種一抗；·缺點(diǎn)：是參加反應(yīng)的因子較多，產(chǎn)生非特異性染色的機(jī)會(huì)增多。?間接免疫熒光法的注意事項(xiàng)·熒光染色后一般在1h內(nèi)完成觀察，或于4℃保存4h。北京七色免疫組化分析服務(wù)

    抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以其達(dá)到對組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下：免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長的熒光。

    [1]免疫組化分類編輯免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下：1.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.2.免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是免疫組織化學(xué)研究中**常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究．3.免疫膠體金技術(shù)就是用膠體金標(biāo)記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究．[1]免疫組化作用編輯免疫組化標(biāo)本實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。

    乳化劑的鑒定·判斷乳化是否充分，可將一滴乳化好的液體滴在水面上(冷水中)，如能長時(shí)間保持圓珠形而不散開，表示乳化達(dá)到要求。(3)免疫方法——免疫途徑·常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內(nèi)、淋巴結(jié)、腳掌等注射?！ひ话悴捎枚帱c(diǎn)注射方法–常在足、掌、腋窩淋巴結(jié)周圍、背部兩側(cè)、頜下、耳后等處的皮內(nèi)或皮下。–皮內(nèi)易引起細(xì)胞免疫反應(yīng)，有利于提高抗體的效價(jià)。(3)免疫方法——免疫途徑(續(xù))·幾點(diǎn)說明：–大動(dòng)物一般不用腹腔注射–顆?？乖褪褂米魟r(shí)不能靜脈注射–抗原寶貴可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法，只需10～100?g抗原即可獲得較好的免疫效果。–皮內(nèi)注射較困難，特別是天冷時(shí)更難注入。(3)免疫方法——次數(shù)及間隔時(shí)間·次數(shù)一般為2～3次(初次免疫和加強(qiáng)免疫)–***注射后，10～15天再加強(qiáng)注射；–劑量同***或?yàn)?**的一半，用不全佐劑或不用佐劑?！らg隔時(shí)間，一般而言，動(dòng)物越大，間隔越長–豚鼠、大鼠為7～8天，兔子為10～15天，羊?yàn)?4～28天；–第三次注射的間隔時(shí)間更長些，效果更好。舉例1：家兔的免疫·初次免疫–用50～200?gAg加入FCA，在背部皮下注射6～8點(diǎn)，每點(diǎn)～，也可肌肉內(nèi)或皮內(nèi)注射；·兩周后，加強(qiáng)免疫–將50～200?gAg于PBS或FIA中。北京七色免疫組化分析服務(wù)

天津七色免疫組化

    使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源比較好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。3、免疫組化和免疫熒光結(jié)果分析：見***場試驗(yàn)講座。案例一DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景：奧運(yùn)會(huì)期間我們課題組研究生都在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)，許多從北京購買的試劑買不到，對我們的許多實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的SP三步法染色試劑盒，效果不錯(cuò)，在奧運(yùn)會(huì)期間我準(zhǔn)備做同批實(shí)驗(yàn)分不同批次酶免疫組化實(shí)驗(yàn)，***批組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果很好，抗體濃度感覺比較合適（SantaCruz公司1：200），等做第二批時(shí)發(fā)現(xiàn)封閉血清不夠了，為了保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，我又從福州邁新頂了一個(gè)SP試劑盒，同時(shí)抗體稀釋液也不夠了，我又重新從博士德公司買了一小瓶10ml。從第二批實(shí)驗(yàn)開始，組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果一直顯示強(qiáng)背景著色，特異性染色很難辨別。后來我將標(biāo)本拿到上海舜田生物去做，做了效果很不錯(cuò)，于是我就請教了他們公司從事病理30多年經(jīng)驗(yàn)的老師，她告訴我應(yīng)該如何去分析和解決問題，很快我就找到了思路，結(jié)果問題終于解決了。天津七色免疫組化

上海朝瑞生物科技有限公司屬于化工的高新企業(yè)，技術(shù)力量雄厚。公司是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，以誠信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神、質(zhì)量高效的管理團(tuán)隊(duì)、精悍的職工隊(duì)伍，努力為廣大用戶提供***的產(chǎn)品。以滿足顧客要求為己任；以顧客永遠(yuǎn)滿意為標(biāo)準(zhǔn)；以保持行業(yè)**為目標(biāo)，提供***的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。上海朝瑞科技自成立以來，一直堅(jiān)持走正規(guī)化、專業(yè)化路線，得到了廣大客戶及社會(huì)各界的普遍認(rèn)可與大力支持。

文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/453035.html