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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,western blot
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詳細(xì)說明
收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖?,Western及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液等,裂解貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對(duì)于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞**白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。收集完蛋白樣品后,為確保每個(gè)蛋白樣品的上樣量一致,需要測定每個(gè)蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因?yàn)椴煌牡鞍诐舛葴y定方法對(duì)于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細(xì)胞裂解液或RIPA裂解液,可以使用BCA蛋白濃度測定試劑盒 江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
轉(zhuǎn)膜完畢后,立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液(P0023C)中,漂洗1-2分鐘,以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟,一定要注意膜的保濕,避免膜的干燥,否則極易產(chǎn)生較高的背景。用微型臺(tái)式真空泵或滴管等吸盡封閉液,立即加入稀釋好的一抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳,可以4℃緩慢搖動(dòng)孵育過夜?;蚋鼡?jù)抗體的說明選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜁r(shí)間。微型臺(tái)式真空泵或滴管等吸盡洗滌液,立即加入稀釋好的二抗,室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)孵育一小時(shí)。 回收二抗。加入Western洗滌液,在側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后,再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。使用
ECL化學(xué)發(fā)光試劑來檢測蛋白。壓片可以采用**的壓片暗盒進(jìn)行。洗片時(shí)可以使用X光片自動(dòng)洗片機(jī)。如果沒有自動(dòng)洗片機(jī),可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進(jìn)行手工洗片。X光片推薦選用柯達(dá)原裝的生物實(shí)驗(yàn)**柯達(dá)X-OMAT BT膠片。 江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
全自動(dòng)單細(xì)胞western blot檢測分析原理:全自動(dòng)單細(xì)胞western blot分析是單細(xì)胞水平,蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片,通過單細(xì)胞微孔設(shè)計(jì),采集單細(xì)胞,然后原位裂解細(xì)胞,釋放蛋白,進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳,將不同分子量蛋白進(jìn)行分離,提高免疫學(xué)檢測特異性。之后,采用**技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)原位捕獲,使用western blot驗(yàn)證抗體及熒光標(biāo)記二抗直接雜交,掃描儀進(jìn)行芯片掃描后,分析軟件對(duì)掃描結(jié)果進(jìn)行深度定量分析。
(1) SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。
(2) 樣品處理:在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。
(3) 上樣與電泳:冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。 為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,比較好使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(P0066)。電泳時(shí)通常推薦在上層膠時(shí)使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時(shí)使用高電壓恒壓電泳。對(duì)于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。通常電泳時(shí)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
免疫印跡法(immunoblotting )因與Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法Southern
blot相類似,亦被稱為Western blot。免疫印跡(western blotting)是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測的基礎(chǔ)上發(fā)展起來一項(xiàng)檢測蛋白質(zhì)的技術(shù)。它將SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的辨力與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括三個(gè)步驟①蛋白質(zhì)的電泳分離;②將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上,用非特異性,非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域;③免疫學(xué)檢測。免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端,極大地提高了其利用率、分辨率和靈敏度,使其成為使用**的免疫化學(xué)方法之一。 天津長條帶Western Blot檢測服務(wù)
江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
全自動(dòng)western blot無需凝膠、無需轉(zhuǎn)印,放入您的樣品,按個(gè)按鈕,然后就沒事了。首先,將樣品與Simple
Western樣品緩沖液混合,至終濃度1 μg/μL,還原并變性,然后將制備好的樣品、一抗和二抗、化學(xué)發(fā)光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后,將Simple
Western分析緩沖液、毛細(xì)管和制備好的分析板放入Simon內(nèi),它自動(dòng)開展所有分析步驟。當(dāng)?shù)鞍籽刂?xì)管內(nèi)一個(gè)堆積和分離基質(zhì)遷移時(shí),它們分離。分離后的蛋白固定到毛細(xì)管壁上。之后利用一抗鑒定目標(biāo)蛋白,用HRP結(jié)合的二抗和化學(xué)發(fā)光底物檢測蛋白。系統(tǒng)自動(dòng)報(bào)告檢測蛋白的分子量和信號(hào)。每次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)分析**多12個(gè)樣品,結(jié)果可在3-5小時(shí)內(nèi)獲得。15-150 kDa的目標(biāo)蛋白均可檢測。軟件報(bào)告每個(gè)檢測蛋白的分子量、面積、面積百分比和信噪比。對(duì)于傳統(tǒng)的Western blot而言,結(jié)果的重復(fù)性一直是個(gè)挑戰(zhàn),因?yàn)槿狈?biāo)準(zhǔn)化的操作,且多個(gè)操作步驟引入了實(shí)驗(yàn)可變性。而Simple Western分析是完全自動(dòng)化的,因此結(jié)果的重復(fù)性更好。整體的定量也**改善了,因?yàn)槭∪チ宿D(zhuǎn)印步驟,從而避免了蛋白轉(zhuǎn)移的不一致。 江蘇全自動(dòng)Western Blot實(shí)驗(yàn)外包
上海朝瑞生物科技有限公司致力于化工,以科技創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)***管理的追求。上海朝瑞科技作為1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的品牌企業(yè),為客戶提供質(zhì)量的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司終堅(jiān)持自主研發(fā)創(chuàng)新發(fā)展理念,不斷優(yōu)化的技術(shù)、產(chǎn)品為客戶帶來效益,目前年?duì)I業(yè)額達(dá)到2000-3000萬元。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工行業(yè)。海納百川,有容乃大,國內(nèi)外同行的智慧都是促使我們前行的力量。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/489442.html
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