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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨,人源Claudin18.2蛋白
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操作方法20包被先取96孔ELISA板,將(ug/ml),按100nL/孔加入板孔中,4t:包被過夜;倒掉包被液,加入封閉液,室溫下封存2h;棄去封閉液,用洗滌液洗6次,每次2min;分別加入倍比稀釋的山羊抗人(500ixg/ml)和抗血清,100pL/L,室溫下孵育lh;棄去抗體和抗血清,用洗漆液洗6次,每次3min;加入HRP標(biāo)記的抗山羊二抗,100uL/孔,室溫孕育lh;棄去二抗,用洗滌液洗6次,每次3min;加入底物顯色液,100uL/L,室溫,顯色10-20min;加入終止液,50uL/孔,終止反應(yīng);酶標(biāo)儀讀數(shù),測(cè)定沒孔在490nm的吸光值。(3)免疫印跡反應(yīng)測(cè)定血清抗分別取人胃*KATOin和胰腺*PANC-1細(xì)胞以及小鼠胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞按照,結(jié)束后,按Bio-Rad產(chǎn)品說明,凝膠靠近陰極一側(cè),硝酸纖維膜(NC膜)靠近陽極一側(cè),置轉(zhuǎn)移緩沖液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒壓lh,將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上,電轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出NC膜,用洗滌液TBST(含mol/LTBS、Tween20)室溫洗3次,浸入封閉液(含2%BSA的TBST)中37'C,1h,洗滌液(TOST)室溫洗3次,加荷瘤小鼠抗血清,37。C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司),北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨,37,北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨,北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨。C孵育lh,TBST室溫洗膜3次,再用TBS洗3次。北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨
25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒壓lh,將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上,電轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出NC膜,用洗滌液TBST(含mol/LTBS、)室溫洗3次,浸入封閉液(含2%BSA的TBST)中37°C,1h,洗滌液(TBST)室溫洗3次,加山羊抗人(Santacruze公司),37'C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司),37。C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,再用TBS洗3次,NC膜浸入OPD顯色液中,室溫避光顯色10min,蒸餾水沖洗終止反應(yīng)(參見圖3)。(3)融合蛋白的純化和復(fù)性取含,5000rpm離心10min,收菌,超聲裂菌;4°C,12000rpm,離心20min,分別收集上清液和沉淀。將沉淀用6mol/L尿素溶液重懸,4'C下靜置溶解。將溶解的沉淀和上清分別取樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳,對(duì)目的蛋白的表達(dá)形式進(jìn)行分析。在證實(shí)目的蛋白以包涵體的形式表達(dá)后,用Ni-NTA柱親和層析純化所溶解的沉淀(包涵體)。按1g菌體加10mL裂菌緩沖液的比例將菌體重懸,冰浴條件下進(jìn)行超聲裂菌。12000rpm,離心15min,棄上清,1g沉淀加10mL6M尿素,,MTris(pH)。4"C攪拌2h,12000rpm,離心15min,共離心2次,收集上清待用。用6M尿素,MNaH2P04,MTris()充分平衡Ni柱,先用含10mmo1咪唑的6M尿素,,()洗脫雜蛋白。天津人源Claudin18.2蛋白規(guī)格齊全
抑瘤實(shí)驗(yàn)每周觀察小鼠體內(nèi)抗體滴度變化,待觀察到形成**組織塊后隔天檢測(cè)**體積和小鼠體重。小鼠死亡時(shí)取出**組織稱重,計(jì)算抑瘤率。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種重組人。本發(fā)明要克服胃*、胰腺*、食道*以及轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移卵巢*免疫***中手術(shù)切除復(fù)發(fā)率高、化療和放療毒副作用強(qiáng)以及單抗***費(fèi)用高等問題。所采用的技術(shù)方案是一種重組人,其序列為HMKSSQYIKANSKFIGEFDQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGLWRSCVRESSGFTECRGYFTLLGLPAMLQAV。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)∶10000以上;該抗體可以與人KATOIII和PANC-1**細(xì)胞以及小鼠胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞相結(jié)合;該蛋白作為**疫苗可***小鼠體內(nèi)胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞的生長(zhǎng)。文檔編號(hào)C12N15/70GKSQ8公開日2009年11月25日申請(qǐng)日期2009年4月27日優(yōu)先權(quán)日2009年4月27日公開號(hào)8.發(fā)明者鐳劉。
其中該抗體或其抗原結(jié)合部分與。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQIDNOs:17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或49的序列。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,包含輕鏈可變區(qū),該輕鏈可變區(qū)包含CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū),其中該CDR1區(qū)、CDR2區(qū)和CDR3區(qū)分別包含(1)SEQIDNOs:10、13和16;(2)SEQIDNOs:11、13和16;(3)SEQIDNOs:10、14和16;(4)SEQIDNOs:12、13和16;或(5)SEQIDNOs:10、15和16的序列。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,其中,包含輕鏈可變區(qū),該輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNOs:50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65或66的序列。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分,包含輕鏈可變區(qū),其中所述重鏈可變區(qū)和所述輕鏈可變區(qū)分別包含(1)SEQIDNOs:17和50;(2)SEQIDNOs:18和51;(3)SEQIDNOs:19和52;(4)SEQIDNOs:20和53;(5)SEQIDNOs:21和54;(6)SEQIDNOs:22和55;(7)SEQIDNOs:23和55;(8)SEQIDNOs:24和55;(9)SEQIDNOs:25和55;(10)SEQIDNOs:26和55;。
3%H202:30uL。h.終止液H2S04:lmol/L。操作方法包被先取96孔ELISA板,將(ug/ml),按100uL/孔加入板孔中,4。C包被過夜;倒掉包被液,加入封閉液,室溫下封存2h;棄去封閉液,用洗滌液洗6次,每次2min;分別加入倍比稀釋的山羊抗人(500ug/ml)和抗血清,100wL/孔,室溫下孵育lh;棄去抗體和抗血清,用洗滌液洗6次,每次3min;加入HRP標(biāo)記的抗山羊二抗,100nL/孔,室溫孕育lh;棄去二抗,用洗滌液洗6次,每次3min;加入底物顯色液,100uL/孔,室溫,顯色10-20min;加入終止液,50"L/孔,終止反應(yīng);酶標(biāo)儀讀數(shù),測(cè)定沒孔在4卯nm的吸光值。免疫印跡反應(yīng)測(cè)定血清抗,結(jié)束后,按Bio-Rad產(chǎn)品說明,凝膠靠近陰極一側(cè),硝酸纖維膜(NC膜)靠近陽極一側(cè),置轉(zhuǎn)移緩沖液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒壓lh,將蛋白從凝膠電轉(zhuǎn)移至NC膜上,電轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出NC膜,用洗滌液TBST(含mol/TBS、Tween20)室溫洗3次,浸入封閉液(含2%BSA的TBST)中37。C,1h,洗滌液(TBST)室溫洗3次,加荷瘤小鼠抗血清,37t孵育1h,TBST室溫洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司),37'C孵育1h,TBST室溫洗膜3次,再用TBS洗3次,NC膜浸入OPD顯色液中,室溫避光顯色10min,蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。天津人源Claudin18.2蛋白規(guī)格齊全
北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨
在大腸桿菌中獲得***表達(dá),經(jīng)親和純化后得到。(3)融合蛋白的純化和復(fù)性表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)裂菌、溶解包涵體、Ni-NTA親和層析柱的純化,蛋白純度可達(dá)80%以上。上述步驟(1)中rhHis-TT-Claudinl8,2蛋白的制備方法是采用RT-PCR方法從人胃*KATOIII細(xì)胞中獲得,將該片段連接TT83,3基因片段后插入pQE-30載體中構(gòu)建;含有目的基因;表達(dá)產(chǎn)物的鑒定;重組蛋白的純化;***小鼠體內(nèi)胃*MFC細(xì)胞和胰腺*MPC-83細(xì)胞的生長(zhǎng)。本發(fā)明的重組人(),通過免疫荷瘤小鼠產(chǎn)生抗,從而有可能為胃*和胰腺*的免疫***提供一種新的蛋白質(zhì)***。本發(fā)明的應(yīng)用目的在于以體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì),從而研究應(yīng)用主動(dòng)免疫的方法進(jìn)行**的免疫***。依照本發(fā)明的技術(shù)方案,釆用RT-PCR的方法獲得,構(gòu)建原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中獲得***表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)溶解包涵體、Ni-NTA親和層析柱的純化,蛋白純度可達(dá)80%以上。純化后的性結(jié)合人胃*KATOIII和胰腺*PANC-1細(xì)胞以及小鼠胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞的抗體,同時(shí)還可以***小鼠體內(nèi)胃*MFC和胰腺*MPC-83細(xì)胞的生長(zhǎng)。通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),使用的抗體可以特異性與胃*和胰腺*等多種**細(xì)胞結(jié)合;正常胃的細(xì)胞和組織與該**疫苗免疫后產(chǎn)生的抗體*有少量結(jié)合。北京高特異人源Claudin18.2蛋白全國(guó)發(fā)貨
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)建于2003-01-22,注冊(cè)資金 700-1000萬元,是一家專注1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司。公司目前擁有5~10人員工,為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長(zhǎng)空間,為客戶提供高質(zhì)高效的產(chǎn)品服務(wù),深受員工與客戶好評(píng)。誠(chéng)實(shí)、守信是對(duì)企業(yè)的經(jīng)營(yíng)要求,也是我們做人的基本準(zhǔn)則。公司致力于打造***的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了優(yōu)良的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/549254.html
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