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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù),western blot
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詳細(xì)說明
(1) SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以使用商業(yè)生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。
(2) 樣品處理:在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積,天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù),在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白,天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)。
(3) 上樣與電泳:冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。 為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小,比較好使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(P0066)。電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳,而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時使用高電壓恒壓電泳,天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)。對于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置,低電壓可以設(shè)置在80-100V,高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。通常電泳時溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。 天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)
全自動單細(xì)胞western blot檢測分析原理:全自動單細(xì)胞western blot分析是單細(xì)胞水平,蛋白質(zhì)表達(dá)定量分析系統(tǒng)。系統(tǒng)采用**的微流控western blot芯片,通過單細(xì)胞微孔設(shè)計,采集單細(xì)胞,然后原位裂解細(xì)胞,釋放蛋白,進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳,將不同分子量蛋白進(jìn)行分離,提高免疫學(xué)檢測特異性。之后,采用**技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)原位捕獲,使用western blot驗證抗體及熒光標(biāo)記二抗直接雜交,掃描儀進(jìn)行芯片掃描后,分析軟件對掃描結(jié)果進(jìn)行深度定量分析。江蘇常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)
1.為SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)??乖鹊鞍讟悠方?jīng)SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰膪凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳動速度就越快。此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區(qū)帶)。2.電轉(zhuǎn)移。將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上,選用低電壓(100V)和大電流(1~2A),通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離的蛋白質(zhì)條帶肉眼仍不可見。3.酶免疫定位。將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜(相當(dāng)于包被了抗原的固相載體)依次與特異性抗體和酶標(biāo)第二抗體作用后,加入能形成不溶性顯色物的酶反應(yīng)底物,使區(qū)帶染色。常用的HRP底物為3,3,—二氨基聯(lián)苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈藍(lán)紫色)。陽性反應(yīng)的條帶清晰可辨,并可根據(jù)SDS-PAGE時加人的分子量標(biāo)準(zhǔn),確定各組分的分子量。本法綜合了SDS-PAGE的辨力和ELISA法的高特異性和敏感性,是一個有效的分析手段,不僅***應(yīng)用于分析抗原組分及其免疫活性,并可用于疾病的診斷。在**中此法作為確診試驗。抗原經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移在硝酸纖維素膜上后,將膜切成小條,配合酶標(biāo)抗體及顯色底物制成的試劑盒可方便地在實驗室中供檢測用。
轉(zhuǎn)膜(Transfer)
推薦在Western實驗中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)也可以使用,但硝酸纖維素膜比較脆,在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產(chǎn)商的推薦使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置,可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電流為300-400mA,轉(zhuǎn)膜時間為30-60分鐘。也可以在15-20mA轉(zhuǎn)膜過夜。具體的轉(zhuǎn)膜時間要根據(jù)目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的轉(zhuǎn)膜時間越長,目的蛋白的分子量越小,需要的轉(zhuǎn)膜時間越短。在轉(zhuǎn)膜過程中,特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時,通常會有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象,比較好把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn),通常分子量比較大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液(P0022)對膜進(jìn)行染色,以觀察實際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液(P0017)對完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色,以觀察蛋白的殘留情況。
收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖?,Western及IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液等,裂解貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白,例如細(xì)胞**白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等,可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白,也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。收集完蛋白樣品后,為確保每個蛋白樣品的上樣量一致,需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同,需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。如果使用Western及IP細(xì)胞裂解液或RIPA裂解液,可以使用BCA蛋白濃度測定試劑盒 天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)
天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)
我國銷售行業(yè)是受經(jīng)濟(jì)波動以及政策影響較大、周期性較強(qiáng)的行業(yè),行業(yè)的周期性與經(jīng)濟(jì)增長的周期性保持著較大的相關(guān)性,近幾年,隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,及處于新技術(shù)**前沿的材料科學(xué)、信息科學(xué)和生命科學(xué)的崛起,客觀上極大地促進(jìn)了精細(xì)化工的迅猛發(fā)展。單一功能的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足現(xiàn)代工業(yè)的巨大需求,多樣化的產(chǎn)品已勢在必行。如復(fù)合陶瓷耐高溫防腐涂料、導(dǎo)電聚苯胺重防腐蝕涂料、自愈合重防腐涂料、納米復(fù)合粉末滲鋅加重防腐涂料。在行業(yè)細(xì)分領(lǐng)域,我國有限責(zé)任公司產(chǎn)業(yè)的發(fā)展帶動化工物流的需求。一方面,化工品大量進(jìn)出口需要專業(yè)化工跨境物流服務(wù)商提供服務(wù);一方面我國化工品的生產(chǎn)和消費(fèi)存在區(qū)域不平衡,使得國內(nèi)化工品運(yùn)輸需求較大。如今,1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實驗室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團(tuán)隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)行業(yè)紛紛走向規(guī)?;?、智能化的道路。加上國家的產(chǎn)業(yè)政策,從環(huán)保的角度、從安全的角度,也要求生產(chǎn)方式從以前傳統(tǒng)的單體設(shè)備的生產(chǎn),變成自動化、清潔化的生產(chǎn)裝置。天津常規(guī)蛋白Western Blot檢測服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)辦于2003-01-22,是一家服務(wù)型的公司。經(jīng)過多年不斷的歷練探索和創(chuàng)新發(fā)展,是一家有限責(zé)任公司企業(yè),隨著市場的發(fā)展和生產(chǎn)的需求,與多家企業(yè)合作研究,在原有產(chǎn)品的基礎(chǔ)上經(jīng)過不斷改進(jìn),追求新型,在強(qiáng)化內(nèi)部管理,完善結(jié)構(gòu)調(diào)整的同時,優(yōu)良的質(zhì)量、合理的價格、完善的服務(wù),在業(yè)界受到***好評。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ],價格合理,品質(zhì)有保證,深受廣大客戶的歡迎。上海朝瑞科技自成立以來,一直堅持走正規(guī)化、專業(yè)化路線,得到了廣大客戶及社會各界的普遍認(rèn)可與大力支持。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/747753.html
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