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蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4 樣品的進(jìn)一步分離純化 用等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì),須進(jìn)一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有:凝膠過(guò)濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時(shí)還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。 1. 凝膠過(guò)濾層析 凝膠過(guò)濾層析(gel-filtration chromatography)又稱(chēng)為分子排阻層析或分子篩層析。它是將葡聚糖凝膠(Sephadex)裝入一個(gè)柱子中,制成凝膠柱。這種凝膠顆粒具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),不同類(lèi)型凝膠的網(wǎng)孔大小不同。當(dāng)把蛋白質(zhì)混合樣品加到凝膠柱中時(shí),比凝膠網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi),而大于網(wǎng)孔的分子則不能進(jìn)入被排阻在凝膠顆粒之外。當(dāng)用洗脫液洗脫時(shí),被排阻的分子量大的蛋白質(zhì)直接通過(guò)凝膠之間的縫隙先被洗脫下來(lái),而比網(wǎng)孔小的蛋白質(zhì)可連續(xù)不斷地進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)。這樣的小分子不但流經(jīng)的路程長(zhǎng),山東蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝,而且受到來(lái)自凝膠內(nèi)部的阻力也很大,所以蛋白質(zhì)越小,山東蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝,從柱子上洗脫下來(lái)所需時(shí)間越長(zhǎng)。由于不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,山東蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝,進(jìn)入網(wǎng)孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脫所用體積及時(shí)間不同,從而達(dá)到分離的目的。山東蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝
蛋白質(zhì)純化方法-親和層析親和層析法包括特異性配體親和層析法以及通用性配體親和層析法。比較這兩種親和層析法。特異性配體親和層析法通常將復(fù)雜的生命大分子物質(zhì)作為配體,它的結(jié)合力比較大河吸附選擇性比較強(qiáng)。而通用性配體親和層析法通常將簡(jiǎn)單的小分子物質(zhì)作為配體,因此,它具有低廉的成本,吸附容量比較高,通過(guò)對(duì)吸附和脫附條件的改善能夠使得層析的分辨率提高。原理親和層析的原理類(lèi)似于酶-底物,***-受體與抗原-抗體等特異性反應(yīng)的機(jī)理。有一定的親和力在每對(duì)反應(yīng)物之間。與在酶與底物的反應(yīng)中,只有特異的底物才可以結(jié)合一定的酶,使復(fù)合物產(chǎn)生相同。在親和層析中,只有特異的配體才可以和一定的生命大分子有親和力,并且使復(fù)合物產(chǎn)生。親和層析配體呈固相,而酶與底物的反應(yīng)底物呈液相是它們的不同點(diǎn)。事實(shí)上,親和層析是在含有活化基團(tuán)的基質(zhì)M上以共價(jià)鍵的方式固化具有識(shí)別能力的配體L,將固相載體制作成功而固化后的配體束縛特異物質(zhì)的能力依然保持。所以當(dāng)在小層析柱裝入固相載體,使得欲分離的樣品在該柱經(jīng)過(guò)。此時(shí),樣品中對(duì)配體有親和力的物質(zhì)S就能夠通過(guò)結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效應(yīng)、范德瓦爾力與靜電引力等作用在固相載體上吸附著。 北京智能蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.4.2 纖維素柱層析法 該法是利用蛋白質(zhì)的酸堿性質(zhì)作為分離的基礎(chǔ)。離子交換纖維素(cellulose ion-exchanger)是人工合成的纖維素衍生物,它具有松散的親水性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),有較大的表面積,使蛋白質(zhì)大分子可以自由通過(guò)。因此常用于蛋白質(zhì)的分離。 (1)羧甲基纖維素(CM-纖維素) 在纖維素顆粒上帶有羧甲基基團(tuán)。在中性pH條件下,羧甲基上的質(zhì)子可解離下來(lái)(圖2-27a),而溶液中帶正電荷的蛋白質(zhì)分子可與纖維素顆粒上的羧甲基負(fù)電荷結(jié)合??山粨Q的基團(tuán)帶正電,因此是一種陽(yáng)離子交換劑。蛋白質(zhì)與離子交換纖維素之間結(jié)合能力的大小取決于彼此間相反電荷基團(tuán)之間靜電吸引。 (2)二乙氨基乙基纖維素(DEAE-纖維素) 在中性pH條件下,它含有帶正電荷的基團(tuán),可與溶液中的帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合,可交換的基團(tuán)帶負(fù)電荷,因此是一種陰離子交換劑。當(dāng)某一蛋白質(zhì)混合溶液通過(guò)裝有DEAE-纖維素的層析柱時(shí),帶正電荷的蛋白質(zhì)不能結(jié)合而隨著洗脫液的流動(dòng)先被洗脫下來(lái)。帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)將被結(jié)合到柱上。結(jié)合力取決于彼此相反電荷基團(tuán)間的靜電吸引。然后選用一定pH和離子強(qiáng)度的緩沖液進(jìn)行洗脫,改變蛋白質(zhì)分子所帶的靜電荷,依次從層析柱流出達(dá)到相互分離的目的。
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 分離純化蛋白質(zhì)的一般程序 2.1 材料的預(yù)處理及細(xì)胞破碎 分離提純某一種蛋白質(zhì)時(shí),首先要把蛋白質(zhì)從組織或細(xì)胞中釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài),不喪失活性。所以要采用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒔M織和細(xì)胞破碎。常用的破碎組織細(xì)胞的方法有: 1. 機(jī)械破碎法 這種方法是利用機(jī)械力的剪切作用,使細(xì)胞破碎。常用設(shè)備有,高速組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽等。 2. 滲透破碎法 這種方法是在低滲條件使細(xì)胞溶脹而破碎。 3. 反復(fù)凍融法 生物組織經(jīng)凍結(jié)后,細(xì)胞內(nèi)液結(jié)冰膨脹而使細(xì)胞脹破。這種方法簡(jiǎn)單方便,但要注意那些對(duì)溫度變化敏感的蛋白質(zhì)不宜采用此法。 4. 超聲波法 使用超聲波震蕩器使細(xì)胞膜上所受張力不均而使細(xì)胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破壞微生物細(xì)胞等。
蛋白質(zhì)分離純化步驟(二) 2.2 蛋白質(zhì)的抽提 通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái)。抽提所用緩沖液的pH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等),使膜結(jié)構(gòu)破壞,利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過(guò)程中,應(yīng)注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質(zhì)的變性。 2.3蛋白質(zhì)粗制品的獲得 選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開(kāi)來(lái)。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法: 1. 等電點(diǎn)沉淀法 不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同,可用等電點(diǎn)沉淀法使它們相互分離。 2. 鹽析法 不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì),并能再度溶解而不變性。 3. 有機(jī)溶劑沉淀法 中性有機(jī)溶劑如乙醇、**,它們的介電常數(shù)比水低。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低,進(jìn)而從溶液中沉淀出來(lái),因此可用來(lái)沉淀蛋白質(zhì)。此外,有機(jī)溶劑會(huì)破壞蛋白質(zhì)表面的水化層,促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出。由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性,使用該法時(shí),要注意在低溫下操作.樣品前處理專(zhuān)業(yè)蛋白純化系統(tǒng)
山東蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝
儀器儀表行業(yè)快速發(fā)展一是因?yàn)閲?guó)家的經(jīng)濟(jì)高速穩(wěn)定發(fā)展的運(yùn)行;按照過(guò)去的經(jīng)驗(yàn),如果GDP的增長(zhǎng)在10%以上時(shí),儀表行業(yè)的增長(zhǎng)率則在26%~30%之間。二是因?yàn)閲?guó)家宏觀調(diào)控對(duì)儀表行業(yè)的影響有一個(gè)滯后期,儀表往往在工程的后期才交付使用,因此,因宏觀調(diào)控政策而減少的投資對(duì)儀表行業(yè)的影響不會(huì)太大。我國(guó)現(xiàn)有其他內(nèi)資企業(yè)企業(yè)數(shù)千多家,已經(jīng)形成門(mén)類(lèi)品種比較齊全,具有一定技術(shù)基礎(chǔ)和生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)業(yè)體系。但同時(shí)業(yè)內(nèi)**也指出,雖然我國(guó)測(cè)試儀器產(chǎn)業(yè)有了一定的發(fā)展,但遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國(guó)民經(jīng)濟(jì)各行各業(yè)日益增長(zhǎng)的迫切需求。[ "蛋白純化色譜系統(tǒng)", "凝膠凈化色譜系統(tǒng)", "制備液相色譜", "柱塞泵" ]產(chǎn)業(yè)是國(guó)民經(jīng)濟(jì)的基礎(chǔ)性、戰(zhàn)略性產(chǎn)業(yè),是信息化和工業(yè)化深度融合的源頭,對(duì)促進(jìn)工業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)、發(fā)展戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)、推動(dòng)現(xiàn)代**建設(shè)、保障和提高人民生活水平具有重要作用。為迎接生產(chǎn)型百年未有之大變局,**認(rèn)為,要重新定義中國(guó)在世界經(jīng)濟(jì)版圖中的地位,要順應(yīng)形勢(shì)實(shí)現(xiàn)制造升級(jí)。以華立集團(tuán)在境外開(kāi)發(fā)“中國(guó)工業(yè)園”的成功案例來(lái)闡述,跨國(guó)經(jīng)營(yíng)要成為企業(yè)主動(dòng)的戰(zhàn)略選擇,在不確定性中更好地活下去,以全球化視野看問(wèn)題,很多困惑在全球化過(guò)程中會(huì)迎刃而解。山東蛋白純化系統(tǒng)上門(mén)安裝
蘇州英賽斯智能科技有限公司是一家機(jī)器人與自動(dòng)化設(shè)備、機(jī)械電子設(shè)備的研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售及技術(shù)咨詢;光學(xué)檢測(cè)設(shè)備、光電產(chǎn)品研發(fā)、制造、銷(xiāo)售;實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、儀器儀表的研發(fā)、制造、銷(xiāo)售及提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和售后服務(wù);自營(yíng)和代理各類(lèi)商品及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)(限定企業(yè)經(jīng)營(yíng)或禁止進(jìn)出口的商品和技術(shù)除外)。(依法需經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng))的公司,致力于成為客戶業(yè)務(wù)創(chuàng)新、儀器儀表可信賴(lài)的合作伙伴。英賽斯深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)В瑸榭蛻籼峁?**的[ "蛋白純化色譜系統(tǒng)", "凝膠凈化色譜系統(tǒng)", "制備液相色譜", "柱塞泵" ]。公司擁有多年的行業(yè)經(jīng)驗(yàn),每年以銷(xiāo)售收入達(dá)到50-100萬(wàn)元,如果您想了解更多產(chǎn)品信息,請(qǐng)通過(guò)頁(yè)面上的電話聯(lián)系我們。英賽斯始終關(guān)注自身,在風(fēng)云變化的時(shí)代,我們對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專(zhuān)注與執(zhí)著使我們?cè)谛袠I(yè)的從容而自信。
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