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免疫組化染色常用于的標(biāo)記物。1,江蘇多靶點免疫組化染色服務(wù)、異硫氰酸熒光素(FITC)FITC性質(zhì)穩(wěn)定,易溶于水和乙醇,能與蛋白質(zhì)結(jié)合,是檢測組織細胞內(nèi)蛋白質(zhì)較為常用的熒光探針。它還能標(biāo)記抗體,可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色,其缺點是在光照下容易淬滅,易受自發(fā)熒光影響,江蘇多靶點免疫組化染色服務(wù)。比較大激發(fā)光波長為490nm;比較大發(fā)射光波長為525nm,呈現(xiàn)黃綠色熒光。免疫組化染色是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究中經(jīng)常要使用的研究方法。美迪西提供免疫組化染色服務(wù),其生物部在體外生物學(xué)領(lǐng)域有豐富***的經(jīng)驗,通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學(xué)、生物化學(xué)、體外同位素測定、穩(wěn)定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術(shù)等,提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。2、四乙基羅丹明(RB200)RB200能與細胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合,不溶于水,易溶于乙醇和**,性質(zhì)穩(wěn)定,可長期保存,***應(yīng)用于雙標(biāo)記示蹤染色。比較大激發(fā)光波長為570nm,江蘇多靶點免疫組化染色服務(wù),比較大發(fā)射光波長為595-600nm,熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光。 江蘇多靶點免疫組化染色服務(wù)
我一般初次做一種新抗體,喜歡先用說明書建議的低濃度和高濃度做一次,然后決定是向高還是低方向摸索。一般先決定二抗的濃度(工作液就好辦了,直接滴加),重點摸索一抗的**適濃度。注意:免疫反應(yīng)中存在前帶和后帶效應(yīng),這提示不是濃度越高,陽性率就越高,反之亦然。⑷重要原因排除之后,也不要忽視抗體的質(zhì)量:原裝抗體一般比較穩(wěn)定,效果較好;而進口分裝次之;工作液可能要注意質(zhì)量問題。3、同時,DAB的孵育時間可能要適當(dāng)延長,在鏡下觀察,有時可延長至30min。但一般3-10min比較好,此時背景也較淺。否則,說明抗體濃度不合適。4、***,血清封閉時間也可相應(yīng)縮短。一般10-30min,但這個時間可以調(diào)整,封閉主要是降低切片的總體背景著色。5、此外,細胞通透也不可忽視。許多戰(zhàn)友認為石蠟切片一般不需細胞通透,因為切片時可能已經(jīng)把細胞切開了,但對于胞**白,建議還是通透一下,促進抗體等試劑充分進入?yún)⑴c反應(yīng)。6、以上原因,都是針對實際中常見原因來進行分析的,前提是排除操作者的操作錯誤而引起陰性結(jié)果,這就需要新手還是要設(shè)置陽性對照以排除方法的問題。還有抗體稀釋液的pH值過低等其它原因的干擾??傊氚衙庖呓M化做好,可能每一個環(huán)節(jié)都很重要。天津六色免疫組化分析服務(wù)
–用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5~25個分子的小肽。免疫細胞化學(xué)技術(shù)抗體(antibody,Ab)1、抗體的概念:免疫球蛋白·機體受到抗原刺激后,由漿細胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白,被稱為抗體。–抗體主要存在于血清內(nèi);–抗體都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不一定都是抗體。–免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種,既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。2、免疫組化實驗中常用的抗體:單克隆抗體和多克隆抗體?!慰寺】贵w:是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,是應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備的。–特異性強、抗體產(chǎn)量高?!ざ嗫寺】贵w:是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。–特異性低,會產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。–多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片,可減少假陰性染色機會。–抗原與抗體的結(jié)合,要求量保持一定比例,當(dāng)抗原或抗體過量時,是不能聚合成大顆粒。3、抗體的制備——多克隆抗體的制備·動物的選擇·佐劑(adjuvant)·免疫方法·免疫劑量·抗體效價的測定·放血或定期抽血。
提高抗原檢測率。常用的修復(fù)方法從強到弱一般分為三種,高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種(具體的可以查閱相關(guān)資料,大量的:中性的、高pH的等)。我們實驗室一般用微波修復(fù)中火6min*4次,效果不錯。注意微波修復(fù)后自然冷卻30min左右(只要你覺得修復(fù)液的溫度達室溫即可)。5)細胞通透目的是使抗體能夠充分地進入胞內(nèi)進行結(jié)合反應(yīng)。一般用TritonX-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解細胞膜、細胞核膜、細胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進入胞漿和胞核內(nèi),故在細胞免疫組化時尤為推薦使用,這樣抗體就能順利進入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。在免疫組織化學(xué)(>10um厚切片)和免疫細胞化學(xué)中一般用TritonX-100作為細胞通透劑,在膜上打孔。同時也是一種去污劑,一般在PBS中加入后終濃度是,而前者終濃度是。石蠟切片4um左右可以不通透,因為細胞已經(jīng)被切開了。6)滅活內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在傳統(tǒng)的ABC法和SP法中,免疫組化反應(yīng)結(jié)果容易收到內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的干擾,必須用過氧化氫和卵白素等進行滅活。滅活內(nèi)源性POD一般3%過氧化氫滅活時間短點,可以10min左右,而,一般10~30min。
中級——問題求助和不斷總結(jié);高級——難題解答和經(jīng)驗分享這三個階段,也學(xué)到了不少知識,積累了很多寶貴經(jīng)驗,與大家一起分享下。免疫組化實驗為例從我接觸的很多本科生和研究生中發(fā)現(xiàn),他們的確是免疫組化“新手”,他們只注重如何做和**終的結(jié)果,但對為什么這樣做不太感興趣。他們常按照網(wǎng)上所說的方法,摸索好的抗體濃度和條件后做出很漂亮的染色結(jié)果后,他們就認為自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法了,結(jié)果不求上進,更換一種新抗體后或?qū)嶒灣霈F(xiàn)異常結(jié)果后就很難做出來了。當(dāng)然,免疫組化對于我來說,做過很多,但也不能說什么都會,只不過我做的多了,失敗多了和思考多了,可能比新手多了解一些其中的訣竅,拿來與大家進行分享。此外,我個人經(jīng)驗不可能面面俱到,還需要更多有經(jīng)驗的高手一起分享、糾正和補充。在這里,我需要感謝中華病理網(wǎng)、丁香通、小木蟲論壇給我很大的幫助,還有上海舜田生物技術(shù)人員老師給我實驗很多指導(dǎo)和幫助,讓我受益匪淺。免疫組化免疫個人感悟1、其實免疫組化,我個人感覺方法和操作都不是很難,關(guān)鍵是結(jié)果出現(xiàn)異常時該如何去解決?我認為首先需要掌握好免疫組化實驗的原理,知道每一個操作步驟的目的。天津六色免疫組化分析服務(wù)
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80年代到90年代相繼又有新的熒光素出現(xiàn)如R-藻紅朊、B-藻紅朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡中廣泛應(yīng)用。由于免疫熒光組織化學(xué)的特異性,快速性和在細胞水平定位的準(zhǔn)確性,已在免疫學(xué)、微生物學(xué)、病理學(xué)、**學(xué)以及臨床檢驗等許多方面得到廣泛應(yīng)用,日益發(fā)揮重要作用。[1]免疫組織化學(xué)技術(shù)現(xiàn)狀與展望編輯免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)經(jīng)過半個多世紀(jì)的不斷改進和創(chuàng)新,已成為現(xiàn)代研究生物和醫(yī)學(xué)的重要手段之一。由于免疫熒光技術(shù)與形態(tài)、機能相結(jié)合不斷完善和發(fā)展,尤其是合成了多種新熒光素與抗體容易結(jié)合,且結(jié)合物穩(wěn)定??梢院虵ITC結(jié)合進行免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)記或三標(biāo)記。至今,它已和親合化學(xué)技術(shù)如SPA、Biotin以及avidin、ConA相結(jié)合,應(yīng)用領(lǐng)域也日益擴大,又與現(xiàn)代的電子計算機、掃描電鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡、熒光***細胞分類器(FACS)以及數(shù)碼相機攝影技術(shù)的應(yīng)用,使得快速性、簡便性有了更大的提高,使得定量更加準(zhǔn)確。90年代又開展了熒光原位末端標(biāo)記和熒光原位雜交技術(shù),使得應(yīng)用范圍更廣。雖然免疫組織化學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展,如免疫金銀法、免疫膠體金法、SP、Evision二步法和CSA法,但由于它有自己獨特的優(yōu)點:特異性強。江蘇多靶點免疫組化染色服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司位于上海市,創(chuàng)立于2003-01-22。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等,價格合理,品質(zhì)有保證。公司從事化工多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計、強大的技術(shù),還有一批**的專業(yè)化的隊伍,確保為客戶提供質(zhì)量的產(chǎn)品及服務(wù)。公司憑借深厚技術(shù)支持,年營業(yè)額度達到2000-3000萬元,并與多家行業(yè)**公司建立了緊密的合作關(guān)系。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/819185.html
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