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產品關鍵詞:天津微滴式數字PCR服務,數字PCR
***更新:2020-08-07 00:17:27
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詳細說明
1999年霍普金斯大學的Vogelstein教授首先提出了第三代的Digital PCR(數字PCR)的概念。此后數字PCR技術得到迅速的發(fā)展。數字PCR是一種核酸檢測和***定量的新方法。同傳統(tǒng)PCR相比,數字PCR增加了一步分隔(partitioning)的操作,將幾十微升的反應體系分隔成了眾多微小**反應體系。核酸模板在這種分割過程中被充分稀釋,理想狀態(tài)下每個微反應體系中至多含有1個分子的核酸模板,天津微滴式數字PCR服務。和qPCR不同,數字PCR不對擴增過程進行實時監(jiān)測,而是檢測end-point的熒光信號,天津微滴式數字PCR服務。擴增完成后所有液滴的熒光將逐個被識別并進行計數,天津微滴式數字PCR服務,不需要構建標準曲線,就可以得到***定量的結果。生物科學屬于基礎科學,研究內容是生命活動的基本規(guī)律。天津微滴式數字PCR服務
ddPCR技術是一種全新的核酸檢測方法,通過將反應體系均分到大量反應單元中,**進行PCR擴增,檢測每個反應單元的熒光信號(熒光信號產生過程參考qPCR), 根據泊松分布和陽性比例計算核酸數量。數字PCR是一種新型的精確定量PCR,擁有靈敏度高,定量準確,檢測的線性范圍寬,特異性好,成本低等優(yōu)點,是一種很有發(fā)展的分子定量檢測方法。
數字PCR技術服務的優(yōu)勢:
1、真正的精確定量,無需外參標準品及標準曲線,數據重復性更好。
2、更高的準確性,不再依賴PCR效率,抑劑耐受度高,模板適用度廣。
3、更高的分辨率,可識別1.1倍濃度差異,適合CNV等類型實驗。
4、更高的靈敏度,單拷貝,0.001% ,適合單細胞基因表達、病原微生物及低頻突變檢測等。
5、兼容染料法和探針法,一定程度上解決探針法非特異性問題及染料法引物二聚體問題。 天津微滴式數字PCR服務傳統(tǒng)生物技術的技術特征是釀造技術,近***物技術的技術特征是微生物發(fā)酵技術。
由于定量PCR的分析**終結果依賴于Cq值,2009年The MIQE Guides(Clinical Chemistry 55 :4 611-622)的發(fā)表明確了定量實驗整個流程標準化的重要性,否則就會出現(xiàn)實驗結果無法重復,甚至結果互相矛盾的狀況。更重要的該文獻還給出了如何規(guī)范定量PCR流程的checklist,其**目的就是在規(guī)范的實驗流程、統(tǒng)一的設計思路下,得到的結果才具有可重復性,也具有可比性。
。為了避免上述傳統(tǒng)PCR的缺點,并對基因的表達水平進行定量分析,1992年誕生了熒光定量實時PCR。
1985年美國科學家Kary Mullis發(fā)明PCR方法以后,PCR已經成為生命科學研究領域中**常規(guī)的實驗方法之一。PCR是用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,可看作是生物體外的特殊DNA復制。PCR的比較大特點,是能將微量DNA大量擴增。
**傳統(tǒng)的一代PCR采用瓊脂糖電泳的方式對PCR產物進行分析,操作繁瑣、難于做定量分析。為使PCR技術能對基因水平進行定量分析,1992年開發(fā)了熒光實時定量PCR(二代PCR)。
在低拷貝靶分子、模板濃度差異的條件下,其檢測靈敏度、精確度都受到了限制。 一般大學都設在生命科學院內,與生物技術,生物工程是兄弟專業(yè)。
數字PCR技術目前在糖尿病中的研究熱點,通過定量檢測非甲基化DNA的水平,對I型糖尿病β細胞死亡進行定量,從而監(jiān)控病情發(fā)展。無創(chuàng)傷的產前診斷, 如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地中海貧血或胎兒遺傳性耳聾基因檢測等。目前無創(chuàng)檢測標本來源主要為孕婦血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準確性。數字PCR技術可以作為二代測序法的補充來進行無創(chuàng)傷產前診斷,從而提高工作效率、降低檢測成本。 掌握資料查詢、文獻檢索及運用現(xiàn)代信息技術獲取相關信息的基本方法。溫州數字PCR定量檢測
這兩個方向的主要區(qū)別個人認為是生物技術更偏重于科研,生物工程更加偏向于生產。天津微滴式數字PCR服務
拷貝數分析基因拷貝數變異(Copy number variations,CNVs)是指人類基因組中存在的,較之于參照基因組DNA片段缺失或復制大于1kb到Mb的亞微觀結構變異,CNVs本身蘊含著豐富的遺傳信息,對于研究基因變異在生物進化及疾病進程等領域具有重要意義。相較于現(xiàn)有的CNVs研究技術(定量PCR、高密度寡核苷酸芯片high
density oligo nucleotide array,F(xiàn)ISH,比較基因組芯片microarray
based comparative genomic hybridization,array-CGH,測序等),數字PCR在靈敏度和分辨率方面更具優(yōu)勢,尤其適用于更高拷貝數分析,確定確切的拷貝數,檢測精度超過±10%。 天津微滴式數字PCR服務
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文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/832561.html
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