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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù),熒光定量PCR
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性高和精確性高的優(yōu)點(diǎn),此項(xiàng)技術(shù)已被應(yīng)用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品檢測和環(huán)境監(jiān)測等多個(gè)領(lǐng)域 。在分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究應(yīng)用 定量核酸濃度:傳統(tǒng)方法是用瓊脂糖凝膠電泳或者分光光度計(jì)測定核酸濃度,其結(jié)果不準(zhǔn)確而且易污染,實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以解決這些問題,北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù),它的準(zhǔn)確性、靈敏度高且無污染,對(duì)一些傳染性疾病進(jìn)行定量分析、病原微生物和***含量檢測,北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù),北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù),此項(xiàng)技術(shù)都是優(yōu)先
研究基因表達(dá):應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)可以對(duì)基因時(shí)間、空間表達(dá)水平差異進(jìn)行比較。例如,對(duì)特定基因用物理、化學(xué)、***等不同方法處理后的差異進(jìn)行比較,為人們的科學(xué)研究提供依據(jù) 北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù)
我司是一家從事制造儀表儀器,集開發(fā)、經(jīng)營、銷售為一體的企業(yè),主營產(chǎn)品:科研技術(shù)服務(wù),應(yīng)用技術(shù)服務(wù),科研成果轉(zhuǎn)化,科學(xué)產(chǎn)品銷售!公司以價(jià)格、質(zhì)量、技術(shù)綜合優(yōu)勢遍銷全國各地。多年來公司每一位員工秉持著“品質(zhì)好、技術(shù)好、服務(wù)好、口碑好
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熒光定量PCR(Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction,F(xiàn)Q-PCR;real-time quantitative PCR, RT-qPCR or qPCR), 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,標(biāo)記**PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng),利用與之相適應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測樣品模板的初始濃度 [1] 。
熒光域值(threshold)的設(shè)定:PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào),熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍
在分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究應(yīng)用
用于單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測分析:人們對(duì)疾病的易感性和對(duì)同一種******同一種疾病的效果是有差異性的,遺傳物質(zhì)DNA的多態(tài)性RELP,STR,ABO血型和SNP是個(gè)體差異的遺傳基礎(chǔ)。SNP在人類基因組中***存在,是人類可遺傳變異中最常見的一種,在遺傳性疾病的研究中具有重要意義
DNA甲基化檢測:DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)重要的標(biāo)記信息,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)獲得基因組甲基化水平數(shù)據(jù)對(duì)表觀遺傳學(xué)的時(shí)空特異性研究具有重要意義
SYBR Green I法:SYBR Green I是一種具有綠色激發(fā)波長的染料,比較大吸收波長約為 497 nm,發(fā)射波長比較大約為 520 nm,可以和所有的 dsDNA 雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合。因?yàn)樵谟坞x狀態(tài)下 SYBR Green I 發(fā)出的熒光較弱,但是當(dāng)它與雙鏈 DNA 結(jié)合后,熒光就會(huì)**增強(qiáng),而且熒光信號(hào)的增加與 PCR 產(chǎn)物的增加完全同步。此法的優(yōu)點(diǎn)是它可以監(jiān)測任何 dsDNA 序列的擴(kuò)增,檢測方法較為簡單,成本較低,但也正是由于熒光染料能和任何dsDNA 結(jié)合,如非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體也能與染料結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號(hào),使實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生假陽性結(jié)果,因此其特異性不如探針法。因?yàn)榉翘禺愋援a(chǎn)物和引物二聚體的變性溫度要比目標(biāo)產(chǎn)物的低,所以可以在熔解曲線反應(yīng)過程中利用軟件分析儀器收集到信號(hào)進(jìn)行鑒別北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù)
北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù)
管家基因反應(yīng)體系: 序號(hào) 反應(yīng)物 劑量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 內(nèi)參照上游引物F 0.5μl 3 內(nèi)參照下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 待測樣品cDNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 總體積 50μl 輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時(shí)上機(jī),反應(yīng)條件為:93℃2分鐘,然后93℃ 1分鐘,55℃ 2分鐘,共40個(gè)循環(huán)。 針對(duì)每一需要測量的基因,選擇一確定表達(dá)該基因的cDNA模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。
反應(yīng)體系: 序號(hào) 反應(yīng)物 劑量 1 10×PCR緩沖液 2.5 ul 2 MgCl2溶液 1.5 ul 3 上游引物F 0.5 ul 4 下游引物R 0.5 ul 5 dNTP混合液 3 ul 6 Taq聚合酶 1 ul 7 cDNA 1 ul 8 加水至總體積為 25ul 輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
35個(gè)PCR循環(huán)(94℃1分鐘;55℃1分鐘;72℃1分鐘); 72℃延伸5分鐘。
PCR產(chǎn)物與 DNA Ladder在2%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色,檢測PCR產(chǎn)物是否為單一特異性擴(kuò)增條帶。
將PCR產(chǎn)物進(jìn)行10倍梯度稀釋: 設(shè)定PCR產(chǎn)物濃度為1×1010,依次稀釋至109、108、107、106、105、104幾個(gè)濃度梯度。 所有cDNA樣品分別配置實(shí)時(shí)定量 PCR反應(yīng)體系。 北京DNA甲基化熒光定量PCR分析服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22,注冊(cè)資本:700-1000萬元。該公司服務(wù)型的公司。上海朝瑞科技是一家有限責(zé)任公司企業(yè),一直貫徹“以人為本,服務(wù)于社會(huì)”的經(jīng)營理念;“質(zhì)量高速,誠守信譽(yù),持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。以滿足顧客要求為己任;以顧客永遠(yuǎn)滿意為標(biāo)準(zhǔn);以保持行業(yè)**為目標(biāo),提供***的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。上海朝瑞科技以創(chuàng)造***產(chǎn)品及服務(wù)的理念,打造高指標(biāo)的服務(wù),引導(dǎo)行業(yè)的發(fā)展。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/836003.html
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