2，江蘇四色免疫組化檢測(cè)服務(wù). 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是目前免疫組織化學(xué)研究中**常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過(guò)光鏡或電鏡，江蘇四色免疫組化檢測(cè)服務(wù)，對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究．3. 免疫膠體金技術(shù)就是用膠體金標(biāo)記一抗，江蘇四色免疫組化檢測(cè)服務(wù)，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究．江蘇四色免疫組化檢測(cè)服務(wù)

    3、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)：該熒光素能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，比FITC穩(wěn)定性好，在生理?xiàng)l件下對(duì)pH值變化不敏感，熒光強(qiáng)度受自發(fā)熒光干擾小。比較大激發(fā)光波長(zhǎng)為550nm；比較大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈橙紅色熒光，與FITC發(fā)出的黃綠色熒光對(duì)比鮮明，常用于免疫熒光組織化學(xué)雙重染色。4、花青類染料常用的有Cy3、Cy5等，能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合。這類染料的熒光特性與傳統(tǒng)熒光素類似，但水溶性和對(duì)光穩(wěn)定性較強(qiáng)，熒光量子產(chǎn)率較高，對(duì)pH等環(huán)境不敏感。常用于多重染色。5、乙酸甲酯其本身不發(fā)熒光，但透膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，在酯酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂袩晒馓匦缘囊宜峒柞ァＦ浼ぐl(fā)光譜有pH依賴性，是使用**多的細(xì)胞內(nèi)pH熒光指示劑。比較大激發(fā)光波長(zhǎng)為505nm，比較大發(fā)射光波長(zhǎng)為530nm，呈綠色熒光。 北京多標(biāo)記免疫組化檢測(cè)服務(wù)

    而高離子強(qiáng)度則有利于分解）11)DAB顯色背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時(shí)間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間，到出現(xiàn)特異性染色較強(qiáng)而本底著色較淺時(shí)即可沖洗；DAB顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間；此外，若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間；DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)（如超過(guò)十幾分鐘）才出現(xiàn)陽(yáng)性染色，一方面可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短（比較好一抗4℃過(guò)夜）；另一方面就是封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。12）復(fù)染目的是形成細(xì)胞輪廓，從而更好地對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位，經(jīng)常用蘇木素復(fù)染（胞核染料）。注意蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況，一般數(shù)秒-數(shù)分鐘，胞漿蛋白可以適當(dāng)時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)，而胞**白則要短。不過(guò)這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。方法是：染色深則分化時(shí)間稍長(zhǎng)些即可；染色淺則再置于蘇木素中染色即可。鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗，然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒（一定動(dòng)作要快）后拿出流水振洗。

    收藏查看我的收藏0有用+1已投票0免疫組化編輯鎖定討論免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。中文名免疫組化外文名immunocytochemistry應(yīng)用免疫學(xué)基本原理稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)目錄1基本原理2分類3作用?標(biāo)本?抗體?常用染色方法4操作步驟?操作步驟?化染色步驟5判定分析6意義?免疫組化鏡檢?細(xì)胞凋亡檢測(cè)?關(guān)于掉片7經(jīng)驗(yàn)總結(jié)?實(shí)驗(yàn)為例?免疫個(gè)人感悟免疫組化基本原理編輯抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái)，以此作為抗原或半抗原，通過(guò)免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無(wú)色的，因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來(lái)，以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。

【多色免疫組化染色樣本要求】1福爾馬林固定的蠟塊或玻片，大塊組織或TMA都可以，封蠟不能有明顯的破損。2玻片樣本，組織需要緊貼玻片，避免褶皺，玻片不能有破損、劃傷或污漬。3組織**小應(yīng)包含大于1000個(gè)細(xì)胞。4蠟塊需包埋實(shí)體瘤組織，壞死瘤組織、細(xì)針穿刺物、細(xì)胞甩片樣品會(huì)影響染色效果。5組織應(yīng)當(dāng)用10%中性福爾馬林固定，正常固定時(shí)間為18～24小時(shí)。6切片厚度為4μm左右，使用防脫玻片。建議玻片在固定后一周內(nèi)制備為佳。7不要在水浴撈片環(huán)節(jié)添加任何粘合劑，樣本應(yīng)置于玻片正面、**。將撈片豎直置于吸水紙上去除水分，輕敲去除水滴，不要用紙擦拭玻片。8玻片置于45°C熱盤(pán)上放置30min（自然風(fēng)干玻片時(shí)長(zhǎng)不小于1小時(shí)）。【設(shè)備耗材】1檢驗(yàn)所需設(shè)備器材：熒光顯微鏡、通風(fēng)櫥、移液器、恒溫干燥箱、微波爐、計(jì)時(shí)器2檢測(cè)所需耗材器皿：免疫組化筆、微波修復(fù)杯、染色缸、孵育濕盒、蓋玻片、洗瓶、量筒100ml、量筒1000ml等【試劑制備】1通用試劑：DMSO、miejun去離子水、二甲苯、乙醇（全部、95%、70%）、10%中性福爾馬林、抗原修復(fù)液（推薦使用佰諾全景酸性或堿性抗原修復(fù)液）、一抗封閉液等。北京多標(biāo)記免疫組化檢測(cè)服務(wù)

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    我單獨(dú)做了一次實(shí)驗(yàn)來(lái)排除該因素。結(jié)果孵育2、5min時(shí)先出現(xiàn)背景，而特異性染色較淺，故這不符合常理，一般先出現(xiàn)特異性染色，然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)出現(xiàn)非特異性背景著色。3、***，血清封閉的問(wèn)題？以前我一般孵育15-30min，所以我單獨(dú)做了一次實(shí)驗(yàn)用血清封閉室溫1h，其它條件同做出來(lái)的那一次，結(jié)果也一樣背景著色很深。4、此外，我在改進(jìn)的同時(shí)，也對(duì)PBS清洗不斷地延長(zhǎng)時(shí)間和增加次數(shù)，甚至完全參照試劑盒說(shuō)明書(shū)來(lái)進(jìn)行操作（我以前一般一抗4℃過(guò)夜且室溫復(fù)溫45min、二抗37℃30min、SP反應(yīng)37℃30min），以及過(guò)氧化氫滅活加強(qiáng)等等均未起到效果。我冷靜地分析了一下整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，與***次做出來(lái)相比，只有兩個(gè)地方做了改動(dòng)：因血清不夠而更換了不同廠家試劑盒、因抗體稀釋液用完而重新買(mǎi)了抗體稀釋液。5、我用PBS替代一抗稀釋液（我以前還回收抗體，自我覺(jué)得抗體稀釋液中含防腐劑和蛋白穩(wěn)定劑），其它步驟和組織切片完全與***次做出來(lái)的一致（包括血清也是老試劑盒內(nèi)剩余的一點(diǎn)），奇跡出現(xiàn)了：結(jié)果很好。因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)除溫度、抗原/抗體濃度外，然后就是pH值，于是我測(cè)了新抗體稀釋液、老抗體稀釋液和PBS的pH值，結(jié)果是前者偏酸性（<6、0），而后兩者均在7、5左右。江蘇四色免疫組化檢測(cè)服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司，創(chuàng)建于2003-01-22。上海朝瑞科技作為1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的品牌企業(yè)，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司擁有多年的行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，每年以銷售收入達(dá)到2000-3000萬(wàn)元，如果您想了解更多產(chǎn)品信息，請(qǐng)通過(guò)頁(yè)面上的電話聯(lián)系我們。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工行業(yè)。海納百川，有容乃大，國(guó)內(nèi)外同行的智慧都是促使我們前行的力量。

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