提高抗原檢測率。常用的修復(fù)方法從強(qiáng)到弱一般分為三種，高壓修復(fù)、微波修復(fù)、胰酶修復(fù)。修復(fù)液也分為若干種（具體的可以查閱相關(guān)資料，大量的：中性的、高pH的等）。我們實(shí)驗(yàn)室一般用微波修復(fù)中火6min*4次，效果不錯(cuò)。注意微波修復(fù)后自然冷卻30min左右（只要你覺得修復(fù)液的溫度達(dá)室溫即可）。5）細(xì)胞通透目的是使抗體能夠充分地進(jìn)入胞內(nèi)進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。一般用TritonX-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解細(xì)胞膜、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi)，故在細(xì)胞免疫組化時(shí)尤為推薦使用，這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。在免疫組織化學(xué)（>10um厚切片）和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用TritonX-100作為細(xì)胞通透劑，北京多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)，在膜上打孔。同時(shí)也是一種去污劑，一般在PBS中加入后終濃度是，而前者終濃度是。石蠟切片4um左右可以不通透，北京多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)，因?yàn)榧?xì)胞已經(jīng)被切開了。6）滅活內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在傳統(tǒng)的ABC法和SP法中，北京多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)，免疫組化反應(yīng)結(jié)果容易收到內(nèi)源性過氧化物酶和生物素的干擾，必須用過氧化氫和卵白素等進(jìn)行滅活。滅活內(nèi)源性POD一般3%過氧化氫滅活時(shí)間短點(diǎn)，可以10min左右，而，一般10~30min。北京多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)

    福爾馬林)應(yīng)用**廣–原理：形成分子間的交聯(lián)，影響蛋白構(gòu)型而使之固定。–優(yōu)點(diǎn)：形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好，且穿透性強(qiáng)，組織收縮少。–缺點(diǎn)：·甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色；·醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙；·分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露?？稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。–注意事項(xiàng)：·縮短固定時(shí)間，降低固定溫度(4?C)，為此組織塊不宜過厚?！じ挠弥行跃彌_福爾馬林，以pH值～，減少固定液pH的變化。·固定后充分水洗以減少分子間交聯(lián)?！で衅谧髅庖呓M化染色前，先經(jīng)預(yù)處理使抗原再現(xiàn)(抗原修復(fù))?！の於酣C穿透性強(qiáng)，微細(xì)結(jié)構(gòu)保存好，但對抗原有一定影響，常與其他固定劑聯(lián)合用作免疫電鏡固定液?！ざ嗑奂兹?常用4%)：–可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光染色。·主要檢測組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細(xì)胞表面抗原，例如各類淋巴細(xì)胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。(2)醇類·**常用的醇類固定劑是乙醇。–其固定作用：使細(xì)胞內(nèi)蛋白、糖類發(fā)生沉淀。–優(yōu)點(diǎn)：穿透性強(qiáng)、抗原性保存好。–缺點(diǎn)：·脫水性強(qiáng)，易引起組織收縮、變硬，影響切片質(zhì)量。北京多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)

    –新載玻片上有油污，要用洗液浸泡12～24h，自來水沖洗后再用蒸餾水清洗；用綢布擦干或烤箱烤干。清潔的載玻片再用粘附劑處理?！こＳ玫恼掣絼┯校酣CAPES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）–Polv-L-Lysine（多聚賴氨酸）–鉻明膠溶液APES(3-aminopropyltriethoxysilane)3-氨丙基三乙氧基硅烷·現(xiàn)用現(xiàn)配。用純**或甲醇配制2%APES(v/v);·將洗凈的玻片浸于此液中20～30秒鐘；·取出稍停片刻，再入純**酮溶液洗去未結(jié)合的APES，置通風(fēng)櫥中晾干或60?C烤箱烤干。Polv-L-Lysine(多聚賴氨酸)·將清潔玻片浸于100?g/ml(10%w/v)的多聚賴氨酸溶液中(去離子水稀釋)，37?C放置30min，然后60?C烤箱烘烤1h或室溫過夜干燥。裝盒備用。鉻明膠溶液·試劑：鉻明礬(chromealum)明膠(gelatine)蒸餾水500ml·先將鉻明礬溶解于40?C少量蒸餾水中，再加入明膠及蒸餾水，可在70?C水浴中使明膠溶化，攪拌均勻后，即可使用。如有殘?jiān)?，可過濾后再用?！び脮r(shí)稍加溶化，切片浸入2～3min，過夜晾干。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)冰凍切片·冰凍切片是指將組織在冷凍狀態(tài)下直接切片?！ぴ谇衅敖M織不經(jīng)過任何化學(xué)藥品處理或加熱過程。–縮短了制片時(shí)間–抗原性不受損失·對穩(wěn)定性差的抗原。

    在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。3）免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。5、被檢測的物質(zhì)組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、***、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。6、特點(diǎn)1）特異性強(qiáng)免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2）敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段。

    使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無熒光鏡油；電源比較好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。3、免疫組化和免疫熒光結(jié)果分析：見***場試驗(yàn)講座。案例一DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景：奧運(yùn)會(huì)期間我們課題組研究生都在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)，許多從北京購買的試劑買不到，對我們的許多實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的SP三步法染色試劑盒，效果不錯(cuò)，在奧運(yùn)會(huì)期間我準(zhǔn)備做同批實(shí)驗(yàn)分不同批次酶免疫組化實(shí)驗(yàn)，***批組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果很好，抗體濃度感覺比較合適（SantaCruz公司1：200），等做第二批時(shí)發(fā)現(xiàn)封閉血清不夠了，為了保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，我又從福州邁新頂了一個(gè)SP試劑盒，同時(shí)抗體稀釋液也不夠了，我又重新從博士德公司買了一小瓶10ml。從第二批實(shí)驗(yàn)開始，組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果一直顯示強(qiáng)背景著色，特異性染色很難辨別。后來我將標(biāo)本拿到上海舜田生物去做，做了效果很不錯(cuò)，于是我就請教了他們公司從事病理30多年經(jīng)驗(yàn)的老師，她告訴我應(yīng)該如何去分析和解決問題，很快我就找到了思路，結(jié)果問題終于解決了。江蘇四色免疫組化檢測服務(wù)

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    6）滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體，室溫/37℃孵育30分鐘-1h，PBS/TBS沖洗，3分鐘×5次。7）應(yīng)用DAB溶液顯色。8）蒸餾水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。三、免疫熒光技術(shù)（略）1、酶免疫組化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)1）標(biāo)本固定固定的目的是①防止標(biāo)本從玻片上脫落；②除去妨礙抗原-抗體結(jié)合的類脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果；③固定的標(biāo)本易于保存。固定劑的選擇一般用4%多聚甲醛，但睪丸組織、眼可能要選用Bouin’s液或mDF液效果較好。2）脫水、石蠟包埋和制片脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對組織要完全浸蠟、切片時(shí)刀片要干凈和鋒利。否則，容易裂片和脫片等。3）脫蠟和水化這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結(jié)合反應(yīng)。脫蠟可以先60℃20min，然后立即二甲苯1-3分別10min（這個(gè)時(shí)間是由二甲苯新鮮程度和室溫等綜合決定的），但當(dāng)天制好的切片一般先60℃3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脫蠟和水化不全易出現(xiàn)局灶性反應(yīng)和浸洗不全，而產(chǎn)生非特異性背景著色。4）抗原修復(fù)由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用，從而失去抗原性；通過抗原修復(fù)，使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露。北京多標(biāo)記免疫組化檢測服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司，創(chuàng)建于2003-01-22。上海朝瑞科技作為1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的品牌企業(yè)，為客戶提供質(zhì)量的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司擁有多年的行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，每年以銷售收入達(dá)到2000-3000萬元，如果您想了解更多產(chǎn)品信息，請通過頁面上的電話聯(lián)系我們。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工行業(yè)。海納百川，有容乃大，國內(nèi)外同行的智慧都是促使我們前行的力量。

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