RNA 常用提取方法（1）

1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:

     原理：使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效制抑RN A 酶的活性，經過起始密度為1.78g/m l 的氯化銫介質，進行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質在上清中。使用這種方法，不但能得到高質量的RNA ，而且能同時分離出細胞染色體DNA。

   

2，北京9分鐘完成RNA提取試劑盒50T/690元、鹽酸胍-有機溶劑法：

     原理：本法有MacDonald1987年在Strohman報道的方法基礎上改進而成的，適用于沒有超速離心及設備的情況下提取細胞總RNA。它利用鹽酸胍制抑RNA酶，勻漿裂解細胞，有機溶劑抽提去除蛋白質,通過選擇性沉淀RNA分子而去除DNA。

     

3、氯化鋰-尿素法：

     原理：本法首先由Auffray報道,利用高濃度尿素變性蛋白質同時制抑RNA酶，北京9分鐘完成RNA提取試劑盒50T/690元，3 mol/L LiCl選擇性沉淀RNA，北京9分鐘完成RNA提取試劑盒50T/690元。 

      

室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min 即得到RNA。北京9分鐘完成RNA提取試劑盒50T/690元

操作快速：**快10分鐘即可獲得高質量的總RNA提取純度高：不含基因組DNA污染，不需DnaseI酶處理產量高：很大程度地獲得樣品中的RNA室溫條件下完成總RNA提取

RNAExpress Lysis Buffer于4 ℃避光保存，其他溶劑及吸附柱室溫保存。

在漂洗液RWB中加入指定量的無水乙醇（分析純），在試劑瓶上標注出，使用完畢后要擰緊試劑瓶，防止乙醇揮發(fā)。

洗脫緩沖液REB中不含有EDTA，一般情況不影響下游實驗。

產品組成組成成分50   PrepsRNAExpress   Lysis Buffer150   ml漂洗液 RWB2（RNase-Free）10ml   (另外添加40ml無水乙醇)洗脫液   REB3(RNase-Free)3   ml離心吸附柱（NcmSpin Column, Rase-Free）含收集管50   個

上海9分鐘完成RNA提取試劑盒哪家強取新鮮或-70℃凍存100mg**在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。

通用RNA提取試劑盒是經過改進開發(fā)的新一代產品，提高了裂解液的裂解能力和提取的靈敏度，同時通過可在特定適宜的條件下特異、可逆地結合RNA，而各種蛋白質和其他雜質均可被去除掉對硅基質膜的改進增強了對RNA的吸附能力，得到的RNA 純度更好，質量更高。該試劑盒可從各種細胞或組織中快速提取總RNA，每個吸附柱每次可處理50–100 mg 組織或5×106 細胞，可同時處理大量不同樣品。一個小時內即可完成反應，提取的總RNA 沒有DNA 和蛋白的污染，可用于Northern blot、Dot blot、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆。

Trizol法提取RNA實驗步驟及原理

1.在提取組織RNA時,每50～100mg組織用1mL Trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞RNA時,先用PBS洗滌/離心沉淀細胞,每5-10 ╳106個細胞加1mL Trizol后, 反復用吹打或劇烈振蕩以裂解細胞.

2、將組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中, 在室溫15~30℃下放置5分鐘；在EP管中,按照每1mL TRIZOL加0.2mL氯仿的量加入氯仿(即為1/5體積), 蓋上EP管蓋子, 在手中用力震蕩15秒(10次), 在室溫下（15℃～30℃）放置2～3分鐘后, 14000rpm（4℃）離心15分鐘.

【注：離心后分為3層，RNA在上層水相, DNA在中間層, 蛋白質在下層有機相】

3、取上層水相置于新EP管中(～500uL, 用200uL的黃色*頭小心吸取, 約吸取3次, 杜絕取到中間層/下層), 按照每1mL Trizol加0.5mL異丙醇的量加入異丙醇(即為1/2體積), 4℃下靜置20分鐘, 沉淀RNA；14000rpm（4℃）離心15分鐘.

 

4、按照每1mL TRIZOL加1mL75%乙醇進行洗滌(即為1倍體積, 注:用DEPC水配置75%乙醇), 混合(#用移液器輕輕吹打即可,不用將沉淀打碎), 14000rpm（4℃）離心20分鐘, 棄上清(#比較好用真空泵吸去上清)；讓沉淀的RNA在室溫下自然干燥(#或在超凈臺中小風吹干,比較好置于干凈的環(huán)境中，防止灰塵雜質進入)；用45uL Rnase-free water 溶解RNA沉淀. 但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當然還有其它的進口試劑盒。

用于各種植物、動物、微生物的RNA提取，在每個試劑盒里都有一份說明使用說明書。實驗者只需要按照說明書上的步驟操作即可。使用時無需配制其它試劑，非常方便，適合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、純度高，可用于分子生物學后實驗。但較好的試劑盒價格比較貴，在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。

一般包括：成分數(shù)量儲藏溫度有效期裂解液100ml2-8℃一年漂洗液30mlRT一年洗柱液100mlRT一年RNasefreeddH2O30mlRT一年RNasefree吸附柱100個RT一年RNasefree收集管(2ml)100個RT一年此外，還配有一份試劑盒使用說明書，根據(jù)不同的生產商，可能還配有不同的試劑，如：DNA酶、溶菌酶等。 當然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好。上海9分鐘完成RNA提取試劑盒哪家強

當前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大。北京9分鐘完成RNA提取試劑盒50T/690元

RNAExpress Total RNA Kit是新賽美生物研發(fā)的新一代快速***的總RNA提取試劑盒，提高了裂解液的效果和增強了提取的靈敏度。通過對產品的多重優(yōu)化，**快能在10分鐘之內得到純度更好，質量更高的總RNA，不含有基因組DNA和蛋白質的污染。同時對硅基質膜的改進增強了對RNA的吸附能力，每個吸附柱可處理高達50mg組織，或5X106細胞。在優(yōu)化的試劑中加入了RNA保護劑，防止RNA在操作過程中發(fā)生降解，即使在室溫條件下也可以完成。提取的總RNA可用于Northern Blot，Dot Blot，PolyA篩選，體外翻譯，RNase保護分析和分子克隆。

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上海朝瑞生物科技有限公司一直專注于1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務，是一家化工的企業(yè)，擁有自己**的技術體系。公司目前擁有5~10人員工，為員工提供廣闊的發(fā)展平臺與成長空間，為客戶提供高質高效的產品服務，深受員工與客戶好評。公司業(yè)務范圍主要包括：[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產品銷售" ]等。公司奉行顧客至上、質量為首、的經營宗旨，深受客戶好評。一直以來公司堅持以客戶為中心、[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產品銷售" ]市場為導向，重信譽，保質量，想客戶之所想，急用戶之所急，全力以赴滿足客戶的一切需要。

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