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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù),免疫組化
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–用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過(guò)功能基團(tuán)-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5~25個(gè)分子的小肽。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)抗體(antibody,Ab)1、抗體的概念:免疫球蛋白·機(jī)體受到抗原刺激后,由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白,被稱為抗體。–抗體主要存在于血清內(nèi);–抗體都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不一定都是抗體。–免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種,既IgG、IgD、IgE、IgA,北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)、IgM。2、免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體:?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體,北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)?!慰寺】贵w:是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備的。–特異性強(qiáng)、抗體產(chǎn)量高。·多克隆抗體:是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后,從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清,是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物,北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)。–特異性低,會(huì)產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。–多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片,可減少假陰性染色機(jī)會(huì)。–抗原與抗體的結(jié)合,要求量保持一定比例,當(dāng)抗原或抗體過(guò)量時(shí),是不能聚合成大顆粒。3、抗體的制備——多克隆抗體的制備·動(dòng)物的選擇·佐劑(adjuvant)·免疫方法·免疫劑量·抗體效價(jià)的測(cè)定·放血或定期抽血。北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)
多重?zé)晒饷庖呓M化與顯色法多重免疫組化不同,多重?zé)晒饷庖呓M化(mIHC)是基于酪胺信號(hào)放大( Tyramide Signal Amplification,TSA)技術(shù),可實(shí)現(xiàn)在同一組織切片樣本上對(duì)多個(gè)靶標(biāo)進(jìn)行區(qū)別標(biāo)記,進(jìn)而分析組織微環(huán)境中蘊(yùn)含的復(fù)雜信息。 多靶標(biāo)組織原位的定位,半定量分析,數(shù)據(jù)更有價(jià)值高清共染圖片,助力高水平文章發(fā)表大幅提升低豐度蛋白的檢出幾率節(jié)省抗體用量,節(jié)約寶貴時(shí)間同一來(lái)源種屬抗體的多重標(biāo)記,無(wú)需更換經(jīng)典克隆節(jié)約珍貴樣本,小切片提供大信息。 天津七色免疫組化染色服務(wù)
免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)組織印片·將潔凈載玻片輕壓于已暴露病灶的新鮮組織切面,細(xì)胞即粘附于玻片,晾干后浸入冷**或醋酸-乙醇固定10min,自然干燥后染片或-20℃保存。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)片(細(xì)胞爬片)·貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),置蓋片于培養(yǎng)瓶中,使細(xì)胞在蓋片上生長(zhǎng),達(dá)適當(dāng)密度后取出固定(**-20?C固定10~20min),再進(jìn)行免疫染色。–蓋片的處理方法同載玻片的處理,但泡酸時(shí)間2h即可。–為了防止細(xì)胞脫片,可用多聚賴氨酸處理。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞涂片·大多數(shù)細(xì)胞涂片由細(xì)胞懸液制成,包括:–血液、尿液、腦脊液;–體腔積液;–組織穿刺吸取,如骨髓、淋巴結(jié)或其他實(shí)質(zhì)性組織–懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或貼壁細(xì)胞經(jīng)消化后形成的懸液。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)細(xì)胞涂片(續(xù))·細(xì)胞涂片的方法:–手涂法·將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)到106/ml左右,可直接涂于載玻片上,但要均勻、不重疊?!D片范圍應(yīng)小于1cm直徑,以節(jié)約試劑。–涂片機(jī)涂片法·將細(xì)胞樣品制成2×105~6/ml細(xì)胞懸液,吸取50~100?l(1~2×104~5cells)加入涂片機(jī)內(nèi),1000rpm離心2min后細(xì)胞就均勻分布于玻片上。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)常用染色方法根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法、免疫酶標(biāo)法、親和組織化學(xué)法。
這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù)。2、原理根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,***通過(guò)呈色反應(yīng)或熒光來(lái)顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。3、分類1)按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。2)按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法)。與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。3)按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合,如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶(PAP)法;親和連接,如卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是比較常用的方法;聚合物鏈接,如即用型二步法。
這樣你才能大膽地去**和糾正一些錯(cuò)誤的步驟,如抗體孵育條件主要是抗體濃度、溫度、時(shí)間,這三者一般是相互成反比的(相對(duì)),其中濃度是**重要的先決條件,溫度決定反應(yīng)的速度、時(shí)間決定反應(yīng)的量。比如溫度有4℃、室溫、37℃。我推薦4℃比較好,反應(yīng)**溫和,背景較淺;而37℃反應(yīng)速度較快,時(shí)間較短;室溫我不太提倡,除非你每次都把環(huán)境溫度控制在一定的范圍,否則,盡量選擇前兩者。2、定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢(shì)。相比于其他蛋白檢測(cè)方法,免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高,是定位檢測(cè)分析優(yōu)先方法。尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。3、免疫組化結(jié)果定量分析的前提是高質(zhì)量的染色切片。免疫組化結(jié)果也能定量分析,但必須是背景染色淺而特異性染色較深的情況下,分析**為準(zhǔn)確,這種原則可能也是我們?nèi)粘徃鍟r(shí)判定研究結(jié)果的必備條件。4、免疫組化實(shí)驗(yàn)一定要設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照一般是用肯定表達(dá)這種抗原的切片來(lái)做;陰性對(duì)照一般是用PBS或非一抗替代一抗來(lái)進(jìn)行反應(yīng),其余步驟均一致。前者是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無(wú)問(wèn)題;后者是排除有無(wú)一抗外的非特異性染色。北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)
北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)
9)抗體稀釋液其實(shí)許多實(shí)驗(yàn)室抗體稀釋液就用一般PBS即可,但**的抗體稀釋液中除PBS成份外,還加了疊氮化鈉防腐劑、BSA穩(wěn)定劑等組份,對(duì)抗體的多次回收利用較好。正因?yàn)檫@種原因,我一直用國(guó)產(chǎn)的**抗體稀釋液,一段時(shí)間在更換新抗體稀釋液時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)了陰性結(jié)果(提示可能一抗沒(méi)有結(jié)合),***從抗體濃度和孵育時(shí)間、封閉時(shí)間等原因排除后,發(fā)現(xiàn)是新抗體稀釋液的PH值偏酸,而使抗原抗體反應(yīng)不佳,終而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。10)切片清洗(浸洗、沖洗和漂洗)為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色,所以適當(dāng)?shù)丶訌?qiáng)清洗(延長(zhǎng)時(shí)間和增多次數(shù))尤為重要,我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次,而一抗孵育后的清洗均為5次*5min。注意:①單獨(dú)沖洗,防止交叉反應(yīng)造成污染。②溫柔沖洗,防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式;③沖洗的時(shí)間要足夠,才能徹底洗去結(jié)合的物質(zhì)。④PBS的PH和離子強(qiáng)度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓(xùn),當(dāng)時(shí)我買的抗體稀釋液偏酸,結(jié)果背景一片黃(未見(jiàn)特異性染色),建議PH在。(中性及弱堿性條件(PH7-8)有利于免疫復(fù)合物的形成,而酸性條件則有利于分解;低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成。北京多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)建于2003-01-22,注冊(cè)資金 700-1000萬(wàn)元,是一家專注1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司。公司目前擁有高技術(shù)人才5~10人人,以不斷增強(qiáng)企業(yè)核心競(jìng)爭(zhēng)力,加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)。公司以誠(chéng)信為本,業(yè)務(wù)領(lǐng)域涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ],我們本著對(duì)客戶負(fù)責(zé),對(duì)員工負(fù)責(zé),更是對(duì)公司發(fā)展負(fù)責(zé)的態(tài)度,爭(zhēng)取做到讓每位客戶滿意。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹(shù)立了優(yōu)良的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。
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