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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津DNA甲基化熒光定量PCR課題承包,熒光定量PCR
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詳細(xì)說明
熒光定量PCR 實(shí)驗(yàn)步驟(1)
樣品RNA的抽提
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②每樣品加入1ml的TRIZOL試劑裂解,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,天津DNA甲基化熒光定量PCR課題承包,天津DNA甲基化熒光定量PCR課題承包,天津DNA甲基化熒光定量PCR課題承包,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用移液器反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 天津DNA甲基化熒光定量PCR課題承包
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-TimePCR)技術(shù)是在PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù),是1996年美國(guó)Applied
Biosystems公司推出,它是通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),然后利用熒光信號(hào)的積累強(qiáng)弱實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知的DNA模板進(jìn)行定量。 天津臨床疾病熒光定量PCR課題承包
實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)指的是在PCR進(jìn)行的同時(shí),對(duì)其過程進(jìn)行監(jiān)測(cè)的能力(即實(shí)時(shí))。因此,數(shù)據(jù)可在PCR擴(kuò)增過程中,而非PCR結(jié)束之后,進(jìn)行收集。這為基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來了**性的變革。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qPCR)中,反應(yīng)以循環(huán)中***檢測(cè)到目標(biāo)擴(kuò)增的時(shí)間點(diǎn)為特征,而非在一定循環(huán)數(shù)后目標(biāo)分子累計(jì)的擴(kuò)增量。目標(biāo)核酸的起始拷貝數(shù)越高,則會(huì)越快觀察到熒光的***增加。相反,終點(diǎn)法檢測(cè)(也稱 “讀板檢測(cè)”)測(cè)量的是PCR循環(huán)結(jié)束時(shí)累計(jì)的PCR產(chǎn)物量。
熒光定量PCR 技術(shù),是通過在PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)驗(yàn)采用兩種定量方式,即***定量和相對(duì)定量。熒光定量PCR 可用于mRNA 表達(dá)量水平檢測(cè)、MicroRNA 表達(dá)量水平檢測(cè)和基因拷貝數(shù)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)的方法可分為SYBR Green I 法和TaqMan 探針法。
客戶提供提供樣本
細(xì)胞:細(xì)胞數(shù)>10^6;
組織:總量>100 mg;
DNA 或RNA 樣品:總量>2 μg。
可選樣本引物:可由客戶提供,沒有引物的情況下,可由生工生物設(shè)計(jì)合成
提供信息
靶基因信息:包括基因序列或GenBank Accession Number 等;背景資料:包括生物物種信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 來源、基因豐度等。**終交付交付報(bào)告
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器、照片及相關(guān)分析數(shù)據(jù)等。
所說的PCR應(yīng)該就是**常規(guī)的PCR,以DNA為模板,通過上下游引物,實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增。
2、RT-PCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription),盡管有些資料上說實(shí)時(shí)熒光定量PCR也(realtime fluores-cence quantitative PCR)也簡(jiǎn)稱RT-PCR,但是這是不對(duì)的,不推薦。
基本操作過程是將所提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,然后將所獲得的cDNA作為模板,設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增,是一種檢測(cè)基因表達(dá)的常用方法。
3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR也就是Real-Time PCR,其比較大的作用是檢測(cè)樣品中的初始DNA濃度。
至于三者的關(guān)系,RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR應(yīng)該都屬于PCR,在RNA實(shí)驗(yàn)中,這二者都會(huì)應(yīng)用到 江蘇基因突變熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
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在分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究應(yīng)用
用于單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測(cè)分析:人們對(duì)疾病的易感性和對(duì)同一種******同一種疾病的效果是有差異性的,遺傳物質(zhì)DNA的多態(tài)性RELP,STR,ABO血型和SNP是個(gè)體差異的遺傳基礎(chǔ)。SNP在人類基因組中***存在,是人類可遺傳變異中**常見的一種,在遺傳性疾病的研究中具有重要意義
DNA甲基化檢測(cè):DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)重要的標(biāo)記信息,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)獲得基因組甲基化水平數(shù)據(jù)對(duì)表觀遺傳學(xué)的時(shí)空特異性研究具有重要意義
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上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22,專業(yè)1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)等多項(xiàng)業(yè)務(wù),主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。目前我公司在職員工達(dá)到5~10人人,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的高效團(tuán)隊(duì)。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為首、的經(jīng)營(yíng)宗旨,深受客戶好評(píng)。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了優(yōu)良的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/869262.html
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