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·免疫動(dòng)物時(shí),將弗氏佐劑與抗原按體積1:1混合乳化后(油包水)注入動(dòng)物。–一般***注射時(shí)用完全佐劑乳化,第二次或第三次注射時(shí)用不完全佐劑或不用佐劑。佐劑與抗原乳化的方法·研磨法:適于制備大量的佐劑抗原–先將不完全佐劑加熱,??;緩緩滴入,邊滴邊按同一方向研磨,使菌體完全分散。–按同樣方法滴人抗原,每加一滴應(yīng)研磨至小滴消失。滴加抗原的速度要慢,待抗原全部加人后,應(yīng)成為乳白色粘稠的油包水乳劑?!と秉c(diǎn):研缽壁上粘附大量乳劑,北京多標(biāo)記免疫組化,抗原損失較大,對(duì)微量或難得抗原不宜采用,北京多標(biāo)記免疫組化。佐劑與抗原乳化的方法(續(xù))·注射器混合法–將等量的完全佐劑和抗原分別吸人兩個(gè)5ml注射器內(nèi),然后插入三通管內(nèi),北京多標(biāo)記免疫組化,交替推動(dòng)針管混勻,往復(fù)操作直至形成粘稠的乳劑為止?!?yōu)點(diǎn):無菌操作,節(jié)省抗原或佐劑。·缺點(diǎn):不易乳化,時(shí)間長(zhǎng)。佐劑與抗原乳化的方法(續(xù))·快速乳化法:利用超聲波粉碎器可快速乳化抗原和佐劑混合物。–將抗原和佐劑按所需量加入一離心管中,置于超聲波粉碎器上,粉碎頭浸入液面下,離瓶底,以免打碎離心管。–每次乳化10~15s,然后置冰箱lmin左右。反復(fù)乳化3~4次即可完全乳化。管內(nèi)殘余量800r/min離心5~10min收集?!?yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)單、快速、節(jié)省材料。北京多標(biāo)記免疫組化
定位準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速、鮮明,在許多領(lǐng)域中仍占有不可取代的地位。如腎活檢、皮膚活檢中IgG、IgM、IgA、C3等檢測(cè),自身抗體的檢測(cè),傳染病的快速診斷,單克隆抗體的篩選及鑒定等。隨著科學(xué)技術(shù)地不斷發(fā)展,免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域,放射出更加五彩繽紛的熒光。參考文獻(xiàn)(1)AkivoshiKawamura,.(2)王伯沄.免疫熒光組織化學(xué)和熒光組織化學(xué)技術(shù).第四軍醫(yī)大學(xué)科技資料增刊,1974;2:5-30.(3).(4)WickG,TraillKN,.(5).(6)蔡文琴,王伯沄主編.實(shí)用免疫細(xì)胞化學(xué).成都:四川科技出版社1990,P968-977.(7)李成文.現(xiàn)代免疫化學(xué)技術(shù).上海:上??萍汲霭嫔?992;P97-100.(8)Mahmudi-A3er-s,Lacy-P,Bablit2-B,(1-2):113-119.(9)Magro-C-M,(9):543-552.(10)(4):286-298.(11)GregoniWeber,(1):419-422.(12)SavigeJA,PaspaliansB,SilvestriniR,(ANCA)(18):568-571.(13)BallouB,FisherGW,DengJS,(3):251-257.(14)GruberHJ,HahnCD,KadaG,(5):696-704.(15)SouthweelBR,(5):1140-1151.(16)ArsenievL,PickerdN,GoudevaL,(5):547-559.(17)O'BrjenTE,MetheneyCD,(TIGR)proteinintrabecularmeshworkandschlemm'(6):517.(18)HuangMC。上海多標(biāo)記免疫組化
時(shí)間過長(zhǎng),會(huì)使熒光減弱?!っ看卧囼?yàn)時(shí),需設(shè)置以下三種對(duì)照:–陽性對(duì)照:陽性血清+熒光標(biāo)記物–陰性對(duì)照:陰性血清+熒光標(biāo)記物–熒光標(biāo)記物對(duì)照:PBS+熒光標(biāo)記物?間接免疫熒光法的注意事項(xiàng)(續(xù))·標(biāo)本片需在操作的各個(gè)步驟中,始終保持濕潤(rùn),避免干燥?!ひ豢购投箲?yīng)始終保持在標(biāo)本片上,避免因放置不平使液體流失,從而造成非特異性熒光染色。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)免疫酶酶標(biāo)法【原理】·以酶作為標(biāo)記物與外加底物作用后產(chǎn)生不溶性色素,沉積于抗原和抗體反應(yīng)的部位;·酶降解底物的量與色澤濃度成正比??煞从潮粶y(cè)定的抗原或抗體的量。1、常用的標(biāo)記酶及其顯色底物·辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)及底物·堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)及底物(1)辣根過氧化物酶(HRP)及底物·HRP是應(yīng)用**廣的一種酶,來源于植物辣根,由無色的酶蛋白和深棕色的鐵葉琳結(jié)合而成,分子量約40kDa,穩(wěn)定性好;·底物為過氧化物和供氫體(DH2)–過氧化物:常用過氧化氫和過氧化氫尿素。–供氫體:多用無色的還原型染料,通過反應(yīng)生成有色的氧化型染料,**常用的供氫體是DAB。DAB(二氨基聯(lián)苯胺)·DAB本身無色,反應(yīng)后呈棕色,不溶于水,不易褪色,電子密度高,**為常用。
但也存在主次之分,出現(xiàn)問題了,需要通過先排除主要的,再依次排除次要的--這是衡量你對(duì)免疫組化原理掌握與否的關(guān)鍵所在。案例三石蠟切片免疫熒光染色呈陰性結(jié)果或非特異性結(jié)果背景:因?qū)嶒?yàn)需要,于2008年07月04日初次做肝臟組織ZO-1(一種胞膜蛋白,緊密連接蛋白)免疫熒光染色,以前我對(duì)酶免疫組化非常熟悉,在丁香園子內(nèi)也有不少置頂貼和精華帖,但免疫熒光一直還沒做過(原理知道,但細(xì)節(jié)不太了解)。我先用石蠟切片做了5次,結(jié)果一直不理想(表現(xiàn)為未見特異性強(qiáng)染色);近幾日,在舜田生物老師的幫助下,我又切了冰凍切片,做了2次,終于基本成功了。在這個(gè)過程中,我對(duì)免疫熒光染色技術(shù)有了全新的認(rèn)識(shí),而前些天發(fā)出免疫熒光求助貼,回復(fù)的很少,所以有必要加強(qiáng)對(duì)免疫熒光方面的討論),不妥之處敬請(qǐng)指正。有人會(huì)問酶免疫組化做的好好的,為何要做免疫熒光?其實(shí),這也是我以前思考的難題,現(xiàn)在我認(rèn)為可能胞膜蛋白含量不高,用普通免疫免疫組化可能做不出來,需要敏感的免疫熒光方法來進(jìn)行蛋白檢測(cè)(我是看許多外文文獻(xiàn)都是這樣做的,因此選擇免疫熒光染色。
免疫組織化學(xué)是一項(xiàng)在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與臨床科研中被廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)技術(shù),免疫組化染色服務(wù)也是生物公司的一項(xiàng)常規(guī)服務(wù)之一。該技術(shù)融合了抗原和抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)技術(shù)與組織學(xué)技術(shù),通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色,來對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位和定量研究。肽類、***、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等,它們的組織細(xì)胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì),所以均可以用免疫組織化學(xué)方法顯示。免疫組化常用的顯色劑包括熒光素、酶、生物素和鐵蛋白等。11、金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物
金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物如鐵蛋白、金和汞可以作為免疫組化反應(yīng)中的標(biāo)記物。如鐵蛋白等,主要應(yīng)用于免疫電鏡。免疫金銀法的基本原理是用特異性抗體與抗原反應(yīng),隨后用金標(biāo)記的間接抗體或SPA蛋白,再與特異性抗體結(jié)合,用乳酸銀處理,使銀顆粒沉積在金顆粒上,還原銀反應(yīng)而顯示出黑褐色。適用于石蠟切片、冰凍切片,培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞涂片和樹脂包埋的電鏡切片。這種方法敏感性高,可檢測(cè)組織中微量抗原,定位準(zhǔn)確、無擴(kuò)散現(xiàn)象且背景清洗,對(duì)比度好、方法簡(jiǎn)便。 北京多標(biāo)記免疫組化
北京多標(biāo)記免疫組化
TSA技術(shù)(Tyramide Signal Amplification?,酪胺信號(hào)放大技術(shù))是做多重免疫熒光染色的一種多快好省的方法,它使同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體,搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn),而且信號(hào)放大的倍數(shù)**增強(qiáng)。如果想要運(yùn)用這個(gè)技術(shù),需要先做四個(gè)方面的準(zhǔn)備工作:嚴(yán)格驗(yàn)證的高特異性抗體:所有CST的IHC-P驗(yàn)證過的抗體都滿足mIHC(多重?zé)晒饷庖呓M化)高特異性的要求;HRP偶聯(lián)的針對(duì)一抗種屬亞型特異的二抗;酪胺熒光素(Perkin Elmer,Thermo Fisher Scientific等供應(yīng)商);多光譜成像系統(tǒng)(PerkinElmer等)。北京多標(biāo)記免疫組化
上海朝瑞生物科技有限公司始建于2003-01-22,坐落于上海市松江區(qū)廣富林路697號(hào)昂立大廈2113室,現(xiàn)有員工5~10人余人。zrbiorise,SPRICELL,scienceladde是上海朝瑞生物科技有限公司的主營(yíng)品牌,是專業(yè)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)公司,擁有自己**的技術(shù)體系。公司以用心服務(wù)為**價(jià)值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。上海朝瑞科技始終以質(zhì)量為發(fā)展,把顧客的滿意作為公司發(fā)展的動(dòng)力,致力于為顧客帶來***的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/875236.html
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