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北京水體基因組熒光定量PCR課題承包
一個評估 PCR 效率的關(guān)鍵參數(shù)是 R2,它是說明如何使用一個數(shù)值預(yù)測另一個數(shù)值的相關(guān)程度的統(tǒng)計學(xué)術(shù)語。如果 R2 為 1,那么 Y 值 (Ct) 可以用來準(zhǔn)確預(yù)測 X 值(圖7A)。如果 R2 為 0,那么就不能通過 Y 值預(yù)測 X 值(圖 7B)。R2 值 >0.99 表示兩個數(shù)值之間相關(guān)的置信度良好。
精確度
標(biāo)準(zhǔn)差(偏差的平方根)是**常用的精確度計量方法。如果許多數(shù)據(jù)點都靠**均值,則標(biāo)準(zhǔn)差就?。蝗绻S多數(shù)據(jù)點都遠離平均值,則標(biāo)準(zhǔn)差就大。
實際上,足夠多重復(fù)次數(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)**形成大致的正態(tài)分布。這經(jīng)??赏ㄟ^經(jīng)典的中心極限定理來證明,該定理稱大量**同分布隨機變量的和在無限多時趨向于正態(tài)分布。如圖 8A 所示,約 68% 的值在平均值的 1 個標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi),約 95% 的值在平均值的 2 個標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi),約 99.7% 的值在平均值的 3 個標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi)。 江蘇**基因熒光定量PCR課題承包
TaqMan探針法:TaqMan 探針法是具有高度特異性的定量 PCR 技術(shù)。它的工作原理是在 PCR 反應(yīng)體系中存在一對 PCR 引物和一條探針,探針的5′ 端標(biāo)記有報告基團,3′ 端標(biāo)記有熒光淬滅基團,探針只與模板特異結(jié)合,其結(jié)合位點在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時候,報告基團的熒光能量被淬滅基團吸收,所以儀器搜集不到信號,隨著反應(yīng)的進展,Taq酶遇到探針,利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探針切斷,導(dǎo)致報告基團的熒光能量不能被淬滅基團吸收,產(chǎn)生了熒光信號,因此信號的強度就**了模板 DNA 的拷貝數(shù)
熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,通過熒光信號不斷累積而實現(xiàn)實時監(jiān)測PCR全程,然后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中,對全程PCR擴增過程進行實時檢測,根據(jù)反應(yīng)時間和熒光信號的變化可以繪制成一條曲線
Ct值:C**Cycle,t**threshold,Ct值的含義是每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)
熒光背景信號階段:在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號與背景無法區(qū)分,無法判斷產(chǎn)物量的變化
實時熒光定量PCR技術(shù)原理將熒光基團加入到PCR反應(yīng)體系中,通過不斷累積熒光信號從而使對PCR全程的實時監(jiān)測實現(xiàn),再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法,即是熒光定量PCR技術(shù)。在實時熒光定量PCR中,實時檢測全程PCR擴增過程,按照反應(yīng)時間和熒光信號的變化能夠?qū)⒁粭l曲線繪制成。混合模板DNA和有熒光素的Taqman探針,遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律使高溫變性,低溫復(fù)性,適溫延伸的熱循環(huán)完成,切斷和模板DNA互補配對的Taqman探針,熒光素在反應(yīng)體系中游離。熒光在特定光激發(fā)下發(fā)出,被擴增的目的基因片段隨著循環(huán)次數(shù)的增加呈級增長,Ct值根據(jù)實時檢測與之對應(yīng)的隨擴增而變化熒光信號強度求取出來,同時對照多個已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,就能夠使待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)得出。北京DNA甲基化熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)
北京水體基因組熒光定量PCR課題承包
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段、熒光信號**擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈**級增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號**擴增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個重要的概念:擴增曲線、熒光閾值、CT值。北京水體基因組熒光定量PCR課題承包
上海朝瑞生物科技有限公司注冊資金700-1000萬元,是一家擁有5~10人***員工的企業(yè)。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等,價格合理,品質(zhì)有保證。公司從事化工多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計、強大的技術(shù),還有一批**的專業(yè)化的隊伍,確保為客戶提供質(zhì)量的產(chǎn)品及服務(wù)。截止當(dāng)前,我公司年營業(yè)額度達到2000-3000萬元,爭取在一公分的領(lǐng)域里做出一公里的深度。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/893724.html
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