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產(chǎn)品關鍵詞:上海熒光定量PCR檢測服務,熒光定量PCR
***更新:2020-08-13 16:17:19
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詳細說明
實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)技術是在PCR技術的基礎上發(fā)展起來的核酸定量技術,它是通過在PCR反應體系中加入熒光基團,然后利用熒光信號的積累強弱實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知的DNA模板進行定量,實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,上海熒光定量PCR檢測服務,為快速準確地分析樣本中的各類待檢物質提供了嶄新的技術工具,現(xiàn)在已被廣泛應用于實驗室及臨床**標志物的檢測。Real-Time PCR與傳統(tǒng)的PCR技術相比其使用了熒光探針標記特定核酸從而提高了準確性;靈敏度提高故使用較少的樣本量,從而減少了樣本消耗殆盡的風險,在一小時左右即可出結果,簡化了傳統(tǒng)PCR方法;全封閉管分析,上海熒光定量PCR檢測服務、利用電腦分析軟件對PCR擴增產(chǎn)物的實時動態(tài)的檢測和自動定量,定量動態(tài)范圍高達五個數(shù)量級,上海熒光定量PCR檢測服務,且結果重現(xiàn)性較好,這也提高了檢測的靈敏度和精密度。 上海熒光定量PCR檢測服務
一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段、熒光信號**擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈**級增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系,無法計算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號**擴增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,故選擇在這個階段進行定量分析。為了定量方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了幾個重要的概念:擴增曲線、熒光閾值、CT值。上海**基因熒光定量PCR技術服務
比較Ct值的相對定量法:此方法是將待測靶基因片段和內參照基因片段同時擴增,可以在兩個反應管中或者一個反應管中進行擴增反應,并且就兩者的ct值之差進行測量。在采用此方法過程中需要用數(shù)學公式進行相對量的計算,首先要假設每個循環(huán)產(chǎn)物增加一倍時PCR反應**期得到Ct值對起始模板的量一個循環(huán)的估算和起始模板數(shù)兩倍相當。這種方法的前提是靶基因和內源控制物的擴增效率基本一致,所以在應用過程中效率的偏移會對實際拷貝數(shù)估計產(chǎn)生一定影響,因此,為了保證目的基因和內參基因的擴增效率相等應當加強對反應體系的優(yōu)化,這也是該方法應用的難點之一
混合液在加入逆轉錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘,取出后立即冰水浴至管內外溫度一致,然后加逆轉錄酶0.5μl,37℃水浴60分鐘。
取出后立即95℃干浴3分鐘,得到逆轉錄終溶液即為cDNA溶液,保存于-80℃待用。 管家基因(β-actin)實時定量PCR
β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011,反應前取3μl按10倍稀釋(加水27μl并充分混勻)為1010,依次稀釋至109、108、107、106、105、104,以備用。
反應體系如下:
標準品反應體系 序號 反應物 劑量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 陽性模板上游引物F 0.5μl 3 陽性模板下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 陽性模板DNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 總體積 50μl 輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
在實時熒光PCR中。模板的定量有2種方法:***定量和相對定量。***定量一般通過已知的標準曲線來確定我們所感興趣基因的拷貝數(shù);相對定量指在一定樣品中靶序列相對于另一參照序列的量的變化
相對定量:相對定量法又分為兩種
比較標準曲線的相對定量法:在一定樣本中,靶序列相對于另一參照樣本量變化情況進行分析的方法為相對定量法。在采用該方法過程中,需要有參照物,所以較容易繪制定量標準曲線,只要將標準品稀釋度確定便可進行對比分析 北京病原微生物熒光定量PCR分析服務
上海熒光定量PCR檢測服務
***定量:用已知的標準曲線對未知樣本的量進行推算的方法為***定量法。此種方法需要明確標準樣品的濃度情況,然后稀釋標準樣品,分為幾個不同梯度濃度然后進行反應測試。橫坐標為標準品拷貝數(shù)的對數(shù)值,縱坐標為測得的Ct值,進而繪制出標準曲線。以標準曲線為基礎,在定量分析未知樣品過程中根據(jù)其ct值能夠將樣起始拷貝數(shù)推算出
實時熒光定量PCR技術總結為以下幾點。特異性強 靈敏度高 重復性好 檢測速度快 自動化程度高
實時熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性高和精確性高的優(yōu)點,此項技術已被應用于分子生物學、醫(yī)學、食品檢測和環(huán)境監(jiān)測等多個領域 上海熒光定量PCR檢測服務
上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22,專業(yè)1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務等多項業(yè)務,主營業(yè)務涵蓋[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產(chǎn)品銷售" ]。唯才是舉,唯能是用:擁有優(yōu)秀人才5~10人和,是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標的基礎,是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司業(yè)務范圍主要包括:[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產(chǎn)品銷售" ]等。公司奉行顧客至上、質量為首、的經(jīng)營宗旨,深受客戶好評。公司憑著雄厚的技術力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實的工作作風、良好的職業(yè)道德,樹立了優(yōu)良的[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉化", "科學產(chǎn)品銷售" ]形象,贏得了社會各界的信任和認可。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/903827.html
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