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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),熒光定量PCR
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詳細(xì)說明
Rn 值是由 Applied Biosystems? FAM? 染料的熒光除以 ROX 染料的熒光而計(jì)算得出的比率。因此,假定 FAM 染料產(chǎn)生的熒光信號保持不變,天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),ROX 染料量越少,產(chǎn)生的 Rn 值就越高。這將導(dǎo)致 Rn 基線上升,以及隨后 ΔRn 的減少和 Ct 值的變化。通過降低 ROX 染料水平而得到不同 Ct 值,天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),沒有對反應(yīng)的真實(shí)靈敏度產(chǎn)生任何影響,卻有著意想不到的后果。如圖 4 所示,天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),降低 ROX 染料的濃度可能會(huì)增加 Ct 值的標(biāo)準(zhǔn)差。標(biāo)準(zhǔn)差越大,分辨靶濃度之間的細(xì)微區(qū)別的可信度就越低(參加下文的精確度一節(jié))。天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)
在PCR擴(kuò)增時(shí)加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸:5’端標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán),3’端標(biāo)記一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號。
在熒光擴(kuò)增曲線上人為設(shè)定的一個(gè)值,它可以設(shè)定在熒光信號**擴(kuò)增階段任意位置上,但一般熒光閾值的設(shè)置是PCR反應(yīng)**-15個(gè)循環(huán)熒光信號標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。 天津水體基因組熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號階段、熒光信號**擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化;在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈**級增加,PCR終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,無法計(jì)算起始模板拷貝數(shù)。因此只有在熒光信號**擴(kuò)增階段,PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,故選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了幾個(gè)重要的概念:擴(kuò)增曲線、熒光閾值、CT值。
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR,又稱為定量 PCR 或 qPCR,可以為測定樣品中的靶標(biāo)序列或基因數(shù)量提供簡單、簡潔的方法。該方法高度簡化,有時(shí)會(huì)忽略實(shí)現(xiàn)方法方面的關(guān)鍵因素,因此導(dǎo)致出現(xiàn)問題。本文將重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)設(shè)置和評估實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)時(shí)必須考慮的這些因素。
熒光信號**擴(kuò)增階段:只有在熒光產(chǎn)生進(jìn)入**期, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,所以在PCR反應(yīng)處于**期的某一點(diǎn)上來檢測PCR產(chǎn)物的量,由此來推斷模板**初的含量而進(jìn)行定量分析。研究表明,每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。通過已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)
在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈**級的增加,所以反應(yīng)終產(chǎn)物量與起始模板量之間已經(jīng)不存在線性關(guān)系,通過反應(yīng)終產(chǎn)物也算不出起始DNA拷貝數(shù) 天津水體基因組熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)
熒光定量PCR(Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction,F(xiàn)Q-PCR;real-time quantitative PCR, RT-qPCR or qPCR), 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù),它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針,標(biāo)記**PCR產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測反應(yīng),利用與之相適應(yīng)的軟件對產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測樣品模板的初始濃度 [1] 。
熒光域值(threshold)的設(shè)定:PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號,熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個(gè)循環(huán)的熒光信號標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍 天津基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司坐落在上海市松江區(qū)廣富林路697號昂立大廈2113室,是一家專業(yè)的1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)公司。目前我公司在職員工達(dá)到5~10人人,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的高效團(tuán)隊(duì)。上海朝瑞生物科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ],堅(jiān)持“質(zhì)量***、質(zhì)量服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。一直以來公司堅(jiān)持以客戶為中心、[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]市場為導(dǎo)向,重信譽(yù),保質(zhì)量,想客戶之所想,急用戶之所急,全力以赴滿足客戶的一切需要。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/915920.html
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