–新載玻片上有油污，要用洗液浸泡12～24h，自來(lái)水沖洗后再用蒸餾水清洗；用綢布擦干或烤箱烤干。清潔的載玻片再用粘附劑處理?！こＳ玫恼掣絼┯校酣CAPES（3-氨丙基三乙氧基硅烷）–Polv-L-Lysine（多聚賴氨酸）–鉻明膠溶液APES(3-aminopropyltriethoxysilane)3-氨丙基三乙氧基硅烷·現(xiàn)用現(xiàn)配，上海六色免疫組化技術(shù)服務(wù)。用純**或甲醇配制2%APES(v/v);·將洗凈的玻片浸于此液中20～30秒鐘；·取出稍停片刻，再入純**酮溶液洗去未結(jié)合的APES，置通風(fēng)櫥中晾干或60?C烤箱烤干。Polv-L-Lysine(多聚賴氨酸)·將清潔玻片浸于100?g/ml(10%w/v)的多聚賴氨酸溶液中(去離子水稀釋)，37?C放置30min，然后60?C烤箱烘烤1h或室溫過(guò)夜干燥。裝盒備用。鉻明膠溶液·試劑：鉻明礬(chromealum)明膠(gelatine)蒸餾水500ml·先將鉻明礬溶解于40?C少量蒸餾水中，再加入明膠及蒸餾水，可在70?C水浴中使明膠溶化，攪拌均勻后，上海六色免疫組化技術(shù)服務(wù)，即可使用。如有殘?jiān)?，可過(guò)濾后再用。·用時(shí)稍加溶化，切片浸入2～3min，過(guò)夜晾干。免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)冰凍切片·冰凍切片是指將組織在冷凍狀態(tài)下直接切片，上海六色免疫組化技術(shù)服務(wù)?！ぴ谇衅敖M織不經(jīng)過(guò)任何化學(xué)藥品處理或加熱過(guò)程。–縮短了制片時(shí)間–抗原性不受損失·對(duì)穩(wěn)定性差的抗原。上海六色免疫組化技術(shù)服務(wù)

    問(wèn)題及其解答：產(chǎn)生組織切片非特異性染色的原因有哪些？如何解決？1、抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過(guò)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來(lái)控制。這是**重要的一條。2、一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。3、內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細(xì)胞多的組織），需要通過(guò)延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來(lái)降低背景染色；4、非特異性組分與抗體結(jié)合，這需要通過(guò)延長(zhǎng)二抗來(lái)源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來(lái)加強(qiáng)封閉效果；5、DAB孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高；6、PBS沖洗不充分，殘留抗體結(jié)果增強(qiáng)著色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤為重要；7、標(biāo)本染色過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)干片，這容易增強(qiáng)非特異性著色。我的實(shí)際解決方案：以上的分析可能對(duì)于初學(xué)者還是不容易的，下面我就把我的排除實(shí)驗(yàn)的具體過(guò)程與大家進(jìn)行分享、交流和討論。1、首先排除抗體孵育條件。一般來(lái)說(shuō)，著色效果的好壞與抗體的孵育條件是密不可分的，由于用SP法已經(jīng)做出來(lái)過(guò)一次且效果不錯(cuò)，因此對(duì)于同樣組織的同一抗原進(jìn)行分析，這種因素可以先排除。2、其次，DAB孵育時(shí)間是否太長(zhǎng)？做出來(lái)那一次我是孵育8min，后來(lái)也是8-10min。上海五色免疫組化分析服務(wù)

    在放入氨水中返蘭即可。13）封片為了長(zhǎng)期保存，我們一般用中性樹(shù)膠等封片，避免產(chǎn)生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對(duì)面的那個(gè)拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時(shí)為止；當(dāng)發(fā)現(xiàn)液體接觸面在不斷彌散時(shí)，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會(huì)產(chǎn)生氣泡。2、免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié)1）冰凍切片制備建議用新鮮組織，否則組織細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴(yán)重。2）組織切片固定切好片風(fēng)干后立即用冰**等固定液進(jìn)行固定5-10min，尤其要較長(zhǎng)時(shí)間保存的白片，一定要及時(shí)固定和適當(dāng)保存。3）血清封閉為防止內(nèi)源性非特異性蛋白抗原的結(jié)合，需要在一抗孵育前先用血清（與二抗來(lái)源一致）封閉，減弱背景著色。血清封閉的時(shí)間是可以調(diào)整的，一般10-30min。4）一抗孵育條件在免疫組化反應(yīng)中**重要，包括孵育時(shí)間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種：4℃、室溫、37℃，其中4℃效果比較好；孵育時(shí)間：這與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37℃1-2h，而4℃過(guò)夜和從冰箱拿出后37℃復(fù)溫45min。具體條件還要摸索。5）二抗孵育條件二抗一般室溫或37℃30min-1h。

    免疫組化染色常用于的標(biāo)記物。1、異硫氰酸熒光素（FITC）FITC性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于水和乙醇，能與蛋白質(zhì)結(jié)合，是檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)較為常用的熒光探針。它還能標(biāo)記抗體，可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色，其缺點(diǎn)是在光照下容易淬滅，易受自發(fā)熒光影響。比較大激發(fā)光波長(zhǎng)為490nm；比較大發(fā)射光波長(zhǎng)為525nm，呈現(xiàn)黃綠色熒光。免疫組化染色是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究中經(jīng)常要使用的研究方法。美迪西提供免疫組化染色服務(wù)，其生物部在體外生物學(xué)領(lǐng)域有豐富***的經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)酶水平測(cè)定、細(xì)胞水平測(cè)定、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、體外同位素測(cè)定、穩(wěn)定細(xì)胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術(shù)等，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。2、四乙基羅丹明（RB200）RB200能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，不溶于水，易溶于乙醇和**，性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存，***應(yīng)用于雙標(biāo)記示蹤染色。比較大激發(fā)光波長(zhǎng)為570nm，比較大發(fā)射光波長(zhǎng)為595-600nm，熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光。

    ⑹、滴加適量生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃孵育10-30分鐘。⑺、PBS沖洗，5分鐘x3次。⑻、滴加適量的辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10-30分鐘。⑼、PBS沖洗，5分鐘x3次。⑽、顯色劑顯色3-15分鐘（DAB或NBT/BCIP）⑾、自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明，封片。免疫組化化染色步驟冰凍切片4-8μm，室溫放置30分鐘后，入4℃**固定10分鐘，PBS洗，5分鐘x3，用過(guò)氧化氫孵育5-10分鐘，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。免疫組化判定分析編輯免疫組化染色（IHC）從實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關(guān)數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點(diǎn)內(nèi)容，只有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作，專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點(diǎn)對(duì)于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關(guān)于上述服務(wù)內(nèi)容應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前由雙方明確，一般而言，客戶方實(shí)驗(yàn)前應(yīng)提出需要什么樣的結(jié)果與分析，例如是簡(jiǎn)要還是詳細(xì)的描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)否，圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗(yàn)或有第三方參與，則事先申明。免疫組化意義編輯近年來(lái)，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)。江蘇多靶點(diǎn)免疫組化

上海六色免疫組化技術(shù)服務(wù)

    80年代到90年代相繼又有新的熒光素出現(xiàn)如R-藻紅朊、B-藻紅朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡中廣泛應(yīng)用。由于免疫熒光組織化學(xué)的特異性，快速性和在細(xì)胞水平定位的準(zhǔn)確性，已在免疫學(xué)、微生物學(xué)、病理學(xué)、**學(xué)以及臨床檢驗(yàn)等許多方面得到廣泛應(yīng)用，日益發(fā)揮重要作用。[1]免疫組織化學(xué)技術(shù)現(xiàn)狀與展望編輯免疫熒光組織化學(xué)技術(shù)經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，已成為現(xiàn)代研究生物和醫(yī)學(xué)的重要手段之一。由于免疫熒光技術(shù)與形態(tài)、機(jī)能相結(jié)合不斷完善和發(fā)展，尤其是合成了多種新熒光素與抗體容易結(jié)合，且結(jié)合物穩(wěn)定?？梢院虵ITC結(jié)合進(jìn)行免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)記或三標(biāo)記。至今，它已和親合化學(xué)技術(shù)如SPA、Biotin以及avidin、ConA相結(jié)合，應(yīng)用領(lǐng)域也日益擴(kuò)大，又與現(xiàn)代的電子計(jì)算機(jī)、掃描電鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡、熒光***細(xì)胞分類器（FACS）以及數(shù)碼相機(jī)攝影技術(shù)的應(yīng)用，使得快速性、簡(jiǎn)便性有了更大的提高，使得定量更加準(zhǔn)確。90年代又開(kāi)展了熒光原位末端標(biāo)記和熒光原位雜交技術(shù)，使得應(yīng)用范圍更廣。雖然免疫組織化學(xué)技術(shù)有了很大的發(fā)展，如免疫金銀法、免疫膠體金法、SP、Evision二步法和CSA法，但由于它有自己獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)。上海六色免疫組化技術(shù)服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司成立于2003-01-22，專業(yè)1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)等多項(xiàng)業(yè)務(wù)，主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。唯才是舉，唯能是用：擁有優(yōu)秀人才5~10人和，是實(shí)現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ)，是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動(dòng)力。誠(chéng)實(shí)、守信是對(duì)企業(yè)的經(jīng)營(yíng)要求，也是我們做人的基本準(zhǔn)則。公司致力于打造***的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德，樹(shù)立了優(yōu)良的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]形象，贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。

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