免疫組化，是應(yīng)用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使結(jié)合抗體的顯色劑進(jìn)行顯色來確定組織或細(xì)胞內(nèi)抗原，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，上海七色免疫組化檢測(cè)服務(wù)。是生命科學(xué)研究中常用且重要的實(shí)驗(yàn)方法。

但是要想得到好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并不是那么容易。

因此，上海七色免疫組化檢測(cè)服務(wù)，上海七色免疫組化檢測(cè)服務(wù)，我們?yōu)槟鷾?zhǔn)備了豐富的實(shí)驗(yàn)課程大餐，將重點(diǎn)講述 IHC 原理，操作流程，注意事項(xiàng)，疑難解答。在講解過程中我們會(huì)用詳實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)向您展示在影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵因素。通過這些課程，您將掌握：正確的IHC實(shí)驗(yàn)操作方法；IHC實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素；常見問題分析及解決的能力； 上海七色免疫組化檢測(cè)服務(wù)

    ）問題及其解答：如何降低非特異性熒光染色和避免陰性著色？1、非特異性染色產(chǎn)生原因及其解決方案：⑴游離熒光素殘留在二抗中。一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。二抗配置時(shí)用透析法或?qū)游龇ǚ蛛x熒光素標(biāo)記的二抗和游離的二抗。購(gòu)買高質(zhì)量、高純度的熒光素二抗。⑵抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結(jié)合。⑶組織抗原封閉不全。除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。延長(zhǎng)血清封閉時(shí)間。⑷從組織中難于提純抗原性物質(zhì)，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。⑸抗體分子上標(biāo)記的熒光素分子太多，這種過量標(biāo)記的抗體分子帶過多的陰離子，可吸附于正常組織上而呈現(xiàn)非特異性染色。⑹熒光素不純、標(biāo)本固定不當(dāng)?shù)?。⑺一抗和二抗孵育條件和濃度不合適。調(diào)整一抗和二抗孵育條件和濃度至比較好。⑻一抗和二抗孵育后的清洗不充分。增加清洗次數(shù)和延長(zhǎng)清洗時(shí)間。2、陰性染色產(chǎn)生的原因有：⑴一抗和二抗?jié)舛炔缓线m或孵育條件不妥。⑵熒光素提前衰退。上海多靶點(diǎn)免疫組化染色服務(wù)

    此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測(cè)。4、幾種常用免疫組化方法簡(jiǎn)單介紹1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。2）免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是**常用的技術(shù)。該方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。

    我單獨(dú)做了一次實(shí)驗(yàn)來排除該因素。結(jié)果孵育2、5min時(shí)先出現(xiàn)背景，而特異性染色較淺，故這不符合常理，一般先出現(xiàn)特異性染色，然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)出現(xiàn)非特異性背景著色。3、***，血清封閉的問題？以前我一般孵育15-30min，所以我單獨(dú)做了一次實(shí)驗(yàn)用血清封閉室溫1h，其它條件同做出來的那一次，結(jié)果也一樣背景著色很深。4、此外，我在改進(jìn)的同時(shí)，也對(duì)PBS清洗不斷地延長(zhǎng)時(shí)間和增加次數(shù)，甚至完全參照試劑盒說明書來進(jìn)行操作（我以前一般一抗4℃過夜且室溫復(fù)溫45min、二抗37℃30min、SP反應(yīng)37℃30min），以及過氧化氫滅活加強(qiáng)等等均未起到效果。我冷靜地分析了一下整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，與***次做出來相比，只有兩個(gè)地方做了改動(dòng)：因血清不夠而更換了不同廠家試劑盒、因抗體稀釋液用完而重新買了抗體稀釋液。5、我用PBS替代一抗稀釋液（我以前還回收抗體，自我覺得抗體稀釋液中含防腐劑和蛋白穩(wěn)定劑），其它步驟和組織切片完全與***次做出來的一致（包括血清也是老試劑盒內(nèi)剩余的一點(diǎn)），奇跡出現(xiàn)了：結(jié)果很好。因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)除溫度、抗原/抗體濃度外，然后就是pH值，于是我測(cè)了新抗體稀釋液、老抗體稀釋液和PBS的pH值，結(jié)果是前者偏酸性（<6、0），而后兩者均在7、5左右。

 

為了在同一張組織切片或細(xì)胞學(xué)涂片上同時(shí)或先后顯示兩種或兩種以上的抗原，發(fā)展了雙重和多重免疫組化技術(shù)。這對(duì)于在原位了解不同抗原的關(guān)系，將形態(tài)與功能相結(jié)合極為有用。

  近年來，雙重標(biāo)記技術(shù)結(jié)合了免疫組化和核酸分子雜交技術(shù)，已跨越蛋白質(zhì)水平，進(jìn)入DNA、RNA水平，可在同一細(xì)胞內(nèi)顯示兩種不同的DNA或mRNA，或者顯示DNA和蛋白質(zhì)。也有人以放射性同位素標(biāo)記和酶組織化學(xué)結(jié)合來顯示靶DNA和抗原。雙重染色的基本方法有雙重?zé)晒夂碗p重酶標(biāo)記法。雙重?zé)晒鈽?biāo)記**常用的是FITC和TMRITC或RB200，雙重酶標(biāo)記常用的是辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶。

上海七色免疫組化檢測(cè)服務(wù)

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    乳化劑的鑒定·判斷乳化是否充分，可將一滴乳化好的液體滴在水面上(冷水中)，如能長(zhǎng)時(shí)間保持圓珠形而不散開，表示乳化達(dá)到要求。(3)免疫方法——免疫途徑·常有靜脈、腹腔、肌肉、皮下、皮內(nèi)、淋巴結(jié)、腳掌等注射?！ひ话悴捎枚帱c(diǎn)注射方法–常在足、掌、腋窩淋巴結(jié)周圍、背部?jī)蓚?cè)、頜下、耳后等處的皮內(nèi)或皮下。–皮內(nèi)易引起細(xì)胞免疫反應(yīng)，有利于提高抗體的效價(jià)。(3)免疫方法——免疫途徑(續(xù))·幾點(diǎn)說明：–大動(dòng)物一般不用腹腔注射–顆?？乖褪褂米魟r(shí)不能靜脈注射–抗原寶貴可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法，只需10～100?g抗原即可獲得較好的免疫效果。–皮內(nèi)注射較困難，特別是天冷時(shí)更難注入。(3)免疫方法——次數(shù)及間隔時(shí)間·次數(shù)一般為2～3次(初次免疫和加強(qiáng)免疫)–***注射后，10～15天再加強(qiáng)注射；–劑量同***或?yàn)?**的一半，用不全佐劑或不用佐劑?！らg隔時(shí)間，一般而言，動(dòng)物越大，間隔越長(zhǎng)–豚鼠、大鼠為7～8天，兔子為10～15天，羊?yàn)?4～28天；–第三次注射的間隔時(shí)間更長(zhǎng)些，效果更好。舉例1：家兔的免疫·初次免疫–用50～200?gAg加入FCA，在背部皮下注射6～8點(diǎn)，每點(diǎn)～，也可肌肉內(nèi)或皮內(nèi)注射；·兩周后，加強(qiáng)免疫–將50～200?gAg于PBS或FIA中。上海七色免疫組化檢測(cè)服務(wù)

上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)立于2003-01-22，總部位于上海市，是一家1.發(fā)布科研技術(shù) 2.發(fā)布應(yīng)用技術(shù) 3.發(fā)布專業(yè)專長(zhǎng) 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務(wù) 8.發(fā)布升級(jí)改造產(chǎn)品服務(wù) 9.發(fā)布實(shí)驗(yàn)室及儀器設(shè)備共享 10.發(fā)布培訓(xùn)基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項(xiàng)目整包服務(wù) 15.發(fā)布資源交換業(yè)務(wù)的公司。上海朝瑞科技深耕行業(yè)多年，始終以客戶的需求為向?qū)?，為客戶提供高品質(zhì)的[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]。公司終堅(jiān)持自主研發(fā)創(chuàng)新發(fā)展理念，不斷優(yōu)化的技術(shù)、產(chǎn)品為客戶帶來效益，目前年?duì)I業(yè)額達(dá)到2000-3000萬(wàn)元。上海朝瑞科技始終關(guān)注化工行業(yè)。海納百川，有容乃大，國(guó)內(nèi)外同行的智慧都是促使我們前行的力量。

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