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產(chǎn)品關鍵詞:北京多靶點免疫組化實驗服務,免疫組化
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詳細說明
80年代到90年代相繼又有新的熒光素出現(xiàn)如R-藻紅朊、B-藻紅朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡中廣泛應用。由于免疫熒光組織化學的特異性,快速性和在細胞水平定位的準確性,已在免疫學、微生物學、病理學、**學以及臨床檢驗等許多方面得到廣泛應用,日益發(fā)揮重要作用。[1]免疫組織化學技術現(xiàn)狀與展望編輯免疫熒光組織化學技術經(jīng)過半個多世紀的不斷改進和創(chuàng)新,已成為現(xiàn)代研究生物和醫(yī)學的重要手段之一。由于免疫熒光技術與形態(tài)、機能相結合不斷完善和發(fā)展,尤其是合成了多種新熒光素與抗體容易結合,且結合物穩(wěn)定??梢院虵ITC結合進行免疫熒光組織化學雙標記或三標記。至今,它已和親合化學技術如SPA、Biotin以及avidin、ConA相結合,應用領域也日益擴大,北京多靶點免疫組化實驗服務,又與現(xiàn)代的電子計算機、掃描電鏡技術、共聚焦顯微鏡、熒光***細胞分類器(FACS)以及數(shù)碼相機攝影技術的應用,使得快速性、簡便性有了更大的提高,北京多靶點免疫組化實驗服務,使得定量更加準確。90年代又開展了熒光原位末端標記和熒光原位雜交技術,使得應用范圍更廣。雖然免疫組織化學技術有了很大的發(fā)展,北京多靶點免疫組化實驗服務,如免疫金銀法、免疫膠體金法、SP、Evision二步法和CSA法,但由于它有自己獨特的優(yōu)點:特異性強。北京多靶點免疫組化實驗服務
因而它是大多數(shù)免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法。1、取材的特殊要求及注意事項·標本新鮮:一般在2h以內(nèi)進行,超過2h,組織將有不同程度的自溶,其抗原或變性消失,或嚴重彌散。·取材部位:除取病灶或含待檢抗原部位外,還應取病灶與正常交界處,即所取組織切片中同時應有抗原陽性和陰性區(qū),以形成自身對照。–細胞壞死后,不僅抗原彌散或消失,而且常引起非特異著色,干擾觀察,因此取材時應盡可能避開壞死區(qū)。1、取材的特殊要求及注意事項(續(xù))·避免擠壓:取材時組織受擠壓可使邊緣部細胞形態(tài)改變并加深非特異著色,因而取材時應使用鋒利的刀刃;–鑷取組織動作要輕;–經(jīng)窺鏡直接鉗取的組織往往有過度擠壓,觀察結果時應有所考慮。2、固定及常用的固定液·取材后的組織需立刻投于固定劑中–固定使組織和細胞的蛋白質(zhì)凝固,終止內(nèi)源性或外源性酶反應,防止組織自溶或異溶,以保持原有結構和形態(tài);–對免疫組化而言更有原位保存抗原的作用,避免抗原失活或彌散?!こS霉潭ㄒ海汗潭▌┢贩N很多,但大多屬于醛類和醇類。其固定原理不同,各有優(yōu)缺點。–醛類(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)–醇類(常用乙醇)–其它(**)(1)醛類·甲醛。天津七色免疫組化技術服務
如淋巴細胞表面抗原尤其適合?!そM織凍結過程中,細胞內(nèi)、外的水分會形成冰晶,凍結的速度愈慢,冰晶顆粒愈大,可嚴重影響組織、細胞的形態(tài)結構。因此制備凍塊時要求低溫、速凍。1、冰凍組織塊的常用方法·液氮中冰凍:組織投入液氮中(一196?C)中10~20sec;·干冰中加入**(或異戊烷),液體立即氣化起泡,溫度降至一70?C,將組織投入,若在干冰**中置一盛有異戊烷的容器,組織投入該容器內(nèi)結凍則更好;–上述組織在速凍時應浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內(nèi),以保護組織。–制成凍塊后若需保存,應以鋁箔或塑料薄膜封包,貯存于-70?C冰箱。2、切片·供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整,并有連續(xù)性?!ぽd玻片也應清潔無油污,但一般無需涂抹粘附劑;·切片時,使用恒溫冷凍切片機,在箱內(nèi)溫度-25?C。切片厚度一般為4~8?m。3、切片后處理·切好的冰凍切片,室溫下自然晾干1~2h后,入4?C**固定10min,待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃?!け鶅銮衅捎谇衅夹g要求較高,不易得到連續(xù)性很好的切片,其形態(tài)結構亦不如石蠟片,且凍塊和切片不便于長期貯存,因此冰凍切片的應用受限。
實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用、**基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中優(yōu)先的組織標本制作方法??贵w免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
免疫組化,是應用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使結合抗體的顯色劑進行顯色來確定組織或細胞內(nèi)抗原,對其進行定位、定性及相對定量的研究。是生命科學研究中常用且重要的實驗方法。
但是要想得到好的實驗結果,并不是那么容易。
因此,我們?yōu)槟鷾蕚淞素S富的實驗課程大餐,將重點講述 IHC 原理,操作流程,注意事項,疑難解答。在講解過程中我們會用詳實的實驗數(shù)據(jù)向您展示在影響實驗結果的關鍵因素。通過這些課程,您將掌握:正確的IHC實驗操作方法;IHC實驗成功的關鍵因素;常見問題分析及解決的能力; 上海多標記免疫組化實驗服務
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9)抗體稀釋液其實許多實驗室抗體稀釋液就用一般PBS即可,但**的抗體稀釋液中除PBS成份外,還加了疊氮化鈉防腐劑、BSA穩(wěn)定劑等組份,對抗體的多次回收利用較好。正因為這種原因,我一直用國產(chǎn)的**抗體稀釋液,一段時間在更換新抗體稀釋液時實驗結果出現(xiàn)了陰性結果(提示可能一抗沒有結合),***從抗體濃度和孵育時間、封閉時間等原因排除后,發(fā)現(xiàn)是新抗體稀釋液的PH值偏酸,而使抗原抗體反應不佳,終而出現(xiàn)假陰性結果。10)切片清洗(浸洗、沖洗和漂洗)為了防止一抗、二抗等試劑殘留而引起非特異性染色,所以適當?shù)丶訌娗逑矗ㄑ娱L時間和增多次數(shù))尤為重要,我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次,而一抗孵育后的清洗均為5次*5min。注意:①單獨沖洗,防止交叉反應造成污染。②溫柔沖洗,防止切片的脫落。我喜歡用浸洗方式;③沖洗的時間要足夠,才能徹底洗去結合的物質(zhì)。④PBS的PH和離子強度的使用和要求。這方面我有慘痛教訓,當時我買的抗體稀釋液偏酸,結果背景一片黃(未見特異性染色),建議PH在。(中性及弱堿性條件(PH7-8)有利于免疫復合物的形成,而酸性條件則有利于分解;低離子強度有利于免疫復合物的形成。北京多靶點免疫組化實驗服務
上海朝瑞生物科技有限公司是一家1.發(fā)布科研技術 2.發(fā)布應用技術 3.發(fā)布專業(yè)專長 4.發(fā)布科研成果 5.發(fā)布我的需求 6.發(fā)布篩選檢驗檢測服務 7.發(fā)布協(xié)同代研發(fā)服務 8.發(fā)布升級改造產(chǎn)品服務 9.發(fā)布實驗室及儀器設備共享 10.發(fā)布培訓基地共享 11.發(fā)布工廠代加工及共享車間 12.發(fā)布科研/項目團隊招聘13.發(fā)布研究生婚戀 14.發(fā)布項目整包服務 15.發(fā)布資源交換業(yè)務的公司,創(chuàng)建于2003-01-22。上海朝瑞科技深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)?,為客戶提?**的[ "科研技術服務", "應用技術服務", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學產(chǎn)品銷售" ]。公司堅持以技術創(chuàng)新為發(fā)展引擎,以客戶滿意為動力,目前擁有5~10人專業(yè)人員,年營業(yè)額達到2000-3000萬元。上海朝瑞科技始終關注自身,在風云變化的時代,我們對自身的建設毫不懈怠,高度的專注與執(zhí)著使我們在行業(yè)的從容而自信。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/946928.html
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