動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。

貼壁細胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻，上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元。

 細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。

血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重復(fù)裂解步驟，上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元，上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。

將處理后的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。 所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元

產(chǎn)品特點：

■ 從微量的樣本中純化得到的高質(zhì)量的RNA，如顯微切割得到的組織， 纖維組織和細胞 。

■ 配有***的DNase Ⅰ，可有效去除DNA 污染。

■ RNA純度更高，無雜質(zhì)殘留，特別適合于對純度要求很高的下游實驗。

■ 操作安全可靠，無需酚/ 氯仿抽提，無需氯化銫梯度離心，無需氯化鋰或乙醇沉淀。

保存條件：

室溫（15-25℃）保存

DNase Ⅰ，緩沖液RDD，RNase-Free ddH2O

（管裝）：2-8℃保存

自備試劑

β- 巰基乙醇、無水乙醇

下游應(yīng)用：

■ RT-PCR。

■ Northern Blot、Dot Blot。

■ Real-Time PCR。

■ 芯片分析。

■ polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆。

上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。

RNA/DNA pull-down是檢測RNA/DNA結(jié)合蛋白與其靶RNA/DNA之間相互作用的主要實驗手段之一。用生物素標記RNA/DNA 探針，與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA/DNA—蛋白質(zhì)復(fù)合物。該復(fù)合物可與鏈親和素標記的磁珠結(jié)合從而與孵育液中的其他成分分離。復(fù)合物洗脫后，通過Western Blot實驗檢測特定的RNA/DNA結(jié)合蛋白是否與RNA/DNA相互作用，還可以對該蛋白進行質(zhì)譜（MS）鑒定蛋白質(zhì)類型。

1.根據(jù)基因序列進行DNA序列T克隆， 體外轉(zhuǎn)錄RNA，進行生物素標記制備RNA探針或直接合成DNA生物素探針，3.細胞裂解液制備 ，4.探針與總蛋白裂解液 pull-down互作結(jié)合蛋白，5. 對結(jié)合蛋白進行純化與分析（WB及蛋白質(zhì)譜分析）。

可選步驟： 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 離心5分鐘，取上清，轉(zhuǎn)入一個新的無RNase 的離心管中。

注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等，可加此步驟離心去除。離心得到的沉淀中包括細胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清溶液中。

 加入200 μl 氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15 s，室溫放置3 min。

 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 離心10 min，樣品會分成三層：黃色的有機相，中間層和無色的水相，RNA 主要在水相中，水相的體積約為所用溶液 RL試劑的60%。把水相轉(zhuǎn)移到新管中，進行下一步操作。***次使用前應(yīng)在溶液 RPI、溶液 RW中加入無水乙醇，加入量請參見瓶上標簽。 從成立之初，凡知醫(yī)學(xué)就致力于基因快速診斷產(chǎn)品開發(fā)，立志從上游**技術(shù)攻關(guān)實現(xiàn)進口替代。

   RNA提取注意事項（2）

 使用正確的細胞或組織儲存條件

在樣品用液氮瞬間凍結(jié)之后，應(yīng)該儲存在-80°C，千萬不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍，也會導(dǎo)致RNA的降解和損失。瞬間凍結(jié)的組織應(yīng)該首先在**溫條件下先研磨成粉，然后置于裂解液中進行勻漿。 RNAfixer使樣品儲存更為便利。儲存在RNA保護試劑中的細胞或組織可在室溫下穩(wěn)定保存長達1個星期，在4°C可穩(wěn)定保存長達1個月，或長久保存在-20°C。具體參數(shù)請看相關(guān)保護試劑說明書。 芯片和試劑，對操作人員技術(shù)要求低，全程只需20分鐘，患者等待周期短，成本低。上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元

也導(dǎo)致基因檢測無法普及至基層醫(yī)療地區(qū)，甚至有的技術(shù)無法走出實驗室應(yīng)用于臨床。上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元

. 樣品處理a. 植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。b. 動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。c. 貼壁細胞：直接在培養(yǎng)板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。d. 細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。e. 血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘， 10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重復(fù)裂解步驟。離心后沉淀加入1 ml裂解液混勻。上海四步完成RNA提取試劑盒500T/5865元

上海朝瑞生物科技有限公司創(chuàng)立于2003-01-22，是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]等，價格合理，品質(zhì)有保證。公司從事化工多年，有著創(chuàng)新的設(shè)計、強大的技術(shù)，還有一批**的專業(yè)化的隊伍，確保為客戶提供質(zhì)量的產(chǎn)品及服務(wù)。公司憑借深厚技術(shù)支持，年營業(yè)額度達到2000-3000萬元，并與多家行業(yè)**公司建立了緊密的合作關(guān)系。

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