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產(chǎn)品關(guān)鍵詞:上?;虮磉_(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù),熒光定量PCR
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TaqMan探針法:TaqMan 探針法是具有高度特異性的定量 PCR 技術(shù)。它的工作原理是在 PCR 反應(yīng)體系中存在一對(duì) PCR 引物和一條探針,探針的5′ 端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán),3′ 端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán),探針只與模板特異結(jié)合,其結(jié)合位點(diǎn)在兩條引物之間。當(dāng)探針完整的時(shí)候,上?;虮磉_(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù),報(bào)告基團(tuán)的熒光能量被淬滅基團(tuán)吸收,上?;虮磉_(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù),所以儀器搜集不到信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)展,上?;虮磉_(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù),Taq酶遇到探針,利用 3′→5′ 外切核酸酶的活性把探針切斷,導(dǎo)致報(bào)告基團(tuán)的熒光能量不能被淬滅基團(tuán)吸收,產(chǎn)生了熒光信號(hào),因此信號(hào)的強(qiáng)度就**了模板 DNA 的拷貝數(shù)上海基因表達(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-Time PCR)技術(shù)是在PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù),它是通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),然后利用熒光信號(hào)的積累強(qiáng)弱實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知的DNA模板進(jìn)行定量,實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,為快速準(zhǔn)確地分析樣本中的各類待檢物質(zhì)提供了嶄新的技術(shù)工具,現(xiàn)在已被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室及臨床**標(biāo)志物的檢測(cè)。Real-Time PCR與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比其使用了熒光探針標(biāo)記特定核酸從而提高了準(zhǔn)確性;靈敏度提高故使用較少的樣本量,從而減少了樣本消耗殆盡的風(fēng)險(xiǎn),在一小時(shí)左右即可出結(jié)果,簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)PCR方法;全封閉管分析、利用電腦分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的檢測(cè)和自動(dòng)定量,定量動(dòng)態(tài)范圍高達(dá)五個(gè)數(shù)量級(jí),且結(jié)果重現(xiàn)性較好,這也提高了檢測(cè)的靈敏度和精密度。 天津基因表達(dá)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
使用可高壓處理的移液器,由于移液器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本 DNA 的污染,因此要使用可高壓處理的移液器 。嚴(yán)格按照試驗(yàn)的分區(qū)進(jìn)行操作,按照提取區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、檢測(cè)區(qū)單方向流動(dòng),物品、樣品和試劑不可逆向流動(dòng) 。操作多份樣品時(shí),制備反應(yīng)混合液,先將熒光 PCR 反應(yīng)液、熒光探針和酶混合好,然后分裝到每個(gè) PCR 管中,這樣即可以減少操作次數(shù),避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度 。加樣品、加蛋白酶 K 和加樣品過程中,特別注意防止樣品的交叉污染和酶的降解 。操作時(shí)設(shè)立陰性及陽性對(duì)照,可驗(yàn)證熒光 PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性和可信性
自從1983年K. Mullis發(fā)明聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction,PCR)以來,PCR技術(shù)很快成為科研、臨床診斷的熱點(diǎn)技術(shù)。
而實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),顧名思義,就是在PCR的基礎(chǔ)上加入熒光基團(tuán),通過熒光信號(hào)的變化的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR的反應(yīng)過程,***通過對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
目前,實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 已成為不同樣品間進(jìn)行基因表達(dá)水平定量差異比較的**性方法。在過去十幾年中,該方法迅速流行,涉及科學(xué)的多個(gè)領(lǐng)域,包括農(nóng)業(yè)、環(huán)境、工業(yè)和醫(yī)學(xué)研究。
產(chǎn)生的 ΔRn 值也不同。請(qǐng)注意,熒光信號(hào)基線屬于非模板依賴性因素,兩種預(yù)混液的基線是不同的(圖 3A)。Ct 值的變化并沒有反映出反應(yīng)系統(tǒng)的整體性能(圖 3B)。靈敏度相當(dāng)?shù)念A(yù)混液產(chǎn)生的 Ct ***值可能不同。
使用預(yù)混液 A 和預(yù)混液 B 在等量的人類 gDNA 中進(jìn)行 RNase P 擴(kuò)增。(A) Rn 根據(jù)循環(huán)數(shù)進(jìn)行繪制,并且顯示兩個(gè)反應(yīng)的基線。(B) 對(duì)數(shù) (ΔRn) 根據(jù)循環(huán)數(shù)進(jìn)行繪制。兩種預(yù)混液的閾值(綠線)設(shè)定為相同水平。對(duì)于相同濃度的靶標(biāo)而言,預(yù)混液 B 的 Ct 值 (CtB) 早于預(yù)混液 A 的相應(yīng)值 (CtA),表明預(yù)混液 B 的基線較低。使用 Applied Biosystems? 7500 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 系統(tǒng)執(zhí)行所有擴(kuò)增。 北京基因突變熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)
上?;虮磉_(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)
實(shí)時(shí)熒光定量常用Taqman探針法和SYBR Green I法兩類。
1.TaqMan探針法
TaqMan 探針法是具有高度特異性的定量PCR技術(shù)。它的工作原理為有一對(duì) PCR 引物和一條探針存在于PCR 反應(yīng)體系中,有熒光淬滅基團(tuán)存在于3′
端標(biāo)記,有報(bào)告基團(tuán)存在于探針的5′ 端標(biāo)記,探針*和模板特異結(jié)合,兩條引物之間是其結(jié)合點(diǎn)。因此信號(hào)儀器搜集不到,伴隨反應(yīng)的進(jìn)展,探針在外切核酸酶的活性的作用下被切斷,從而造成淬滅基團(tuán)不能吸收基團(tuán)的熒光能量,從而使熒光信號(hào)產(chǎn)生,所以模板 DNA 的拷貝數(shù)取決于信號(hào)的強(qiáng)度。
2.SYBR Green I法
SYBR Green I為一種具有綠色激發(fā)波長(zhǎng)的染料,其發(fā)射波長(zhǎng)比較大約為 520 nm,比較大吸收波長(zhǎng)約為 497 nm,能夠結(jié)合所有的雙螺旋小溝區(qū)域。由于處于游離狀態(tài),SYBR Green I發(fā)出的熒光較弱,然而其結(jié)合雙鏈 DNA之后,就會(huì)使得熒光**增強(qiáng),熒光信號(hào)的增加完全同步PCR 產(chǎn)物的增加。 上?;虮磉_(dá)熒光定量PCR檢測(cè)服務(wù)
上海朝瑞生物科技有限公司位于上海市,創(chuàng)立于2003-01-22。公司自成立以來,以質(zhì)量為發(fā)展,讓匠心彌散在每個(gè)細(xì)節(jié),公司旗下[ "科研技術(shù)服務(wù)", "應(yīng)用技術(shù)服務(wù)", "科研成果轉(zhuǎn)化", "科學(xué)產(chǎn)品銷售" ]深受客戶的喜愛。公司從事化工多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計(jì)、強(qiáng)大的技術(shù),還有一批**的專業(yè)化的隊(duì)伍,確保為客戶提供質(zhì)量的產(chǎn)品及服務(wù)。截止當(dāng)前,我公司年?duì)I業(yè)額度達(dá)到2000-3000萬元,爭(zhēng)取在一公分的領(lǐng)域里做出一公里的深度。
文章來源地址: http://www.cdcfah.com/cp/972864.html
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